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- RayBiotech
- MTH-CNQ
- 美国
- 2025年07月15日
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- 技术资料
- 英文名：
Human Absolute Mitochondrial DNA Copy Number Quantification qPCR Assay Kit
- 规格：
50T/100T
RayBio®线粒体DNA拷贝数绝对定量试剂盒（H-mtDNA-CNQ）是一种基于TaqmanTM探针的qPCR检测方法，用于人类mtDNA-CN的特定定量测量。
mtDNA引物和探针均特异性靶向人类mtDNA上最保守的区域之一，不会扩增出核基因组DNA上的任何脱靶序列。同时，新增单拷贝基因（IFNB1-人类 /36B4-小鼠）的引物和探针特异性识别和扩增110 bp长的核基因组DNA，作为数据归一化的参考。优化后的PCR配方在较宽的线性动态范围内提供了优越的特异性和效率。
本试剂盒可在一次反应中通过线粒体（mt）和核(n) DNA的比较来测定人类线粒体DNA拷贝数。
Kit Components
| Component | Size / Description |
|---|---|
| 2X Probe qPCR Master Mix | 1 mL / 1 tube |
| Primer and Probe Mix | 0.5 mL / 1 tube |
| Reference DNA (1000 copies/cell) | 100 µL / 1 tube |
| Nuclease-free H2O | 1000 µL / 1 tube |
Additional Materials Required
- Fluorescence qPCR instrument capable of reading FAM (494nm maximum absorption, 518nm maximum emission) and VIC (532nm maximum absorption, 552nm maximum excitation) channels
- Sterile nuclease-free pipette tips (barrier tips recommended)
- Microfuge tubes
- Compatible PCR Plate
- Microcentrifuge
- Vortex Mixer
Assay Procedure Summary
- Prepare all reagents, samples and standards as instructed.
- Load the PCR reaction mix and samples.
- Seal the PCR reaction tubes or plate.
- Set up the PCR Amplification.
- Export the results.
- Calculate mtDNA copy number.
Specificity
Reproducibility
Typical Data
Storage/Stability
The kit can be stored at -20°C for a period of 12 months prior to opening. After opening, the reagents are valid for at least 6 months if stored at -20°C. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
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文献和实验信息。此外，线粒体作为细胞中的微小细胞器，小小的身体却有着大大的能量，可谓是「细胞的发电站」，是能量产生的工厂。 人类线粒体基因组 16,569bp，从母系遗传而来，其中 95% 的序列编码 13 种蛋白质、22 种 tRNA 以及 2 种核糖体 RNA，这些 RNA 对于氧化磷酸化过程以及 ATP 形式的细胞能量的产生至关重要。目前已知线粒体 DNA 中有 90 种致病点突变，每 5000 人中至少有 1 人会发生这种突变，当发生基因突变，就会引起与能量代谢相关的严重遗传疾病，如二型糖尿病、心肌病以及神经
浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。5. 溶解曲线不止一个主峰引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的 mix 试剂盒。模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异
荧光定量 PCR 的常见异常结果除了扩增曲线异常、融解曲线异常两类常见情况外，qPCR 实验中通常还会遇到以下三大类情况： 1. 复孔间重复性差怎么办？ 复孔间重复性差一般会有以下两种情况： （1）CT 值很大，如 CT≥ 30，重复性差属于正常现象。该现象符合泊松分布，即在有效模板量很少的情况下，模板与引物的碰撞存在随机性，直接导致复孔间的 CT 值差异较大。 解决方法：如果融解曲线没有杂峰，无模板阴性对照同目的基因的 △CT 值为 3 or 5 以上，那 CT 值为准确的，可多设置
