- ¥680
- solarbio
- 北京
- CA1020
- 2025年07月11日
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低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
见说明
- 库存：
现货
- 供应商：
索莱宝
- 规格：
20T
ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡检测试剂盒
品牌：Solarbio | 货号：CA1020
- 英文名称 : Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
- 储存条件 : 2-8°C，复检期为一年
- 单位 : 盒
产品说明：
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为 35.8 KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结合到凋亡细胞后，在蓝色光的激发下，发出绿色荧光，区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一种核酸染料，它不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。将 FITC-Annexin V 与 PI 匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。
操作步骤:
1、 用 27ml 的去离子水稀释 3ml Binding Buffer（10×）至 30ml，每次用 3ml。
2、 收集细胞（1×106 个/次），然后用冷的 PBS 洗涤。（对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用 PBS涤）。
3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 悬浮细胞，300×g 离心 10min，弃上清。
4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重悬细胞，使细胞的密度达到 1×106 个/ml。
5、 每管加入 100µL 细胞（1×105 个）。
6、 再向管中加入 5µL Annexin V-FITC。
7、 室温，避光，轻轻地混匀，10min。
8、 加入 5µL PI，室温，避光，孵育 5min。
9、 加入 PBS 至 500µL，轻轻混匀。
10、在 1 小时内用流式细胞仪检测。
注意事项：
1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2、Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在保存与操作时请注意避光。
3、Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用。
4、在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免 PBS 残留影响实验结果。
5、PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行 Annexin V-FITC 染色，上机前 5分钟再加入 PI 染色。
6、整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在 4℃下操作。
7、反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应 1 小时后荧光强度就开始衰变。
8、成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上 PS 的密度、发生凋亡时 PS 翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的。
此试剂盒仅供科研使用。
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文献和实验：敏感度高，适合于检测少量样本，小部分凋亡细胞。如临床活组织检测。 Fasta921 zhaohu552211 wrote:感谢大家！我现在做的是大鼠的肝脏组织，不是细胞，在这种情况下我可以做AnnexV嘛？我知道AnnexV可以做细胞的，如果可以做组织的话，我定那家的试剂盒，具体要注意什么？ 听说这个电泳很难掌握条件！再次感谢大家！ 兄弟，貌似做AnnexinV国产很多不能做组织，呵呵！我没做过组织，没经验，提供点资料看看！美国ADL Annexin V-FITC & PI凋亡检测试剂盒
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
