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- 2025年07月08日
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见说明书
- 检测方法：
酶联免疫
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科研
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见说明书
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血清/组织/尿液
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书
SCD（HY-100234） RIA KIT
硬脂酰辅酶A 去饱和酶(stearoyl-coenzyme Adesaturase, SCD) 是催化饱和脂肪酸(saturated fattyacid, SFA) 第9 位碳链形成n-9 系单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid, MUFA) 的关键酶。理论上其底物是十二碳到十八碳的饱和脂肪酸，实际在细胞内其底物以棕榈酸(C16:0) 和硬脂酸(C18:0) 为主。分别生成的棕榈油酸和油酸是磷脂和中性脂( 包
括甘油三酯和胆固醇酯等) 的重要组成部分。SCD 的调控作用与脂质代谢及胰岛素抵抗密切相关。
标本的收集：匀浆液，离心，取上清
反应原理：用碳14标记硬脂酸作为底物，加入一系列SCD酶促试剂，经酶作用后得到的产物，通过适当的分离，测定产物的脉冲数即可换算出酶的活力单位。
该药盒主要应用范围：
脂代谢方面的研究
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书药盒组成：（常温运输，4℃保存）
1． 缓冲液 1瓶
2． 酶促试剂 1瓶（含MgCL2，ATP，NADH、BSA、GSH、辅酶A）
3． 碳14标记硬脂酸 1瓶（溶于甲苯中）(Amershanm Biosciences)
4．闪烁剂 1瓶（含PPO、POPOP、甲苯、TrtionX-100）
5. 终止液 1瓶（含ＫＯＨ、甲醇）
6．硬脂酸油酸溶液 1瓶
7.盐酸溶液 1瓶
8、三氯化硼甲醇溶液 1瓶
9.正己烷溶液（9:1） 1瓶
10.硅胶板 1块
11.展开剂 1瓶
12.2,7二氯荧光素乙醇溶液 1瓶
测定方法：本实验采用平衡法，取聚苯乙烯试管编号，按下表操作：
SCD RIA加液程序 （单位： ul ）
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试 剂 T NSB 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100
样 品 —— —— 100
酶促试剂 100 100 100
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摇匀，37度5分钟
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标记物 5 5 5
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混匀，37度10分钟后
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终止液 100 100 100
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硬脂酸油酸 5 5 5
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80度水浴30分钟
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盐酸溶液 100 100 100
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混匀 室温10分钟
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三氯化硼甲醇100 100 100
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80度水浴30分钟
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正己烷 300 300 300
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振荡，离心萃取，取上层，重复两次，并在氮气下吹干
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正己烷 100 100 100
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取10微升上述溶液放在硅胶板点样，进行薄层层析，
将薄板上的油酸甲酯的位置上的硅胶粉放到闪烁瓶中，上机，测CPM值。
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书 结果计算：
酶活力=饱和脂肪酸的单不饱和脂肪酸的放射活性的量
（每毫克酶蛋白每分钟形成多少纳摩尔的油酸 oil nmol/min/mg protein）
注意事项：
薄板层上硅胶粉油酸甲酯放射性位置的确定：点样1小时以后，用2，7二氯荧光素乙醇液喷，在紫外灯下，油酸甲酯酯位置发出荧光，确定其位置，将此位置上的硅胶粉取出称重，然后放到闪烁瓶中进行测量。（确定位置时应稍大于荧光标识面积，以避免移取过程中损失）
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文献和实验20~30 mL 汁液，按推荐试剂盒进行前处理后，浓缩 50 倍，得到 400 μL 左右植物囊泡。 5）处理： ① 硬皮的植物根茎（如葛根）需要洗净、削去硬的外皮后，将根茎尽可能切小块或削成小片，少量多次地投入榨汁机榨汁； ② 薄皮的植物根茎（如麦冬）可以洗净外皮泥土后，直接切小块榨汁。 6）提取试剂盒推荐：按照植物出汁后的汁液状态选择对应的试剂盒； ① 宇玫博- UR5220 植物囊泡提取纯化试剂盒（多汁植物）； ② 宇玫博- UR5221 植物囊泡提取纯化试剂盒（粘稠汁液植物）。
）。而就种类来说，UnBlot也可以用于3-8%，4-12%，8-18%，4-20% 和 10-20%的梯度胶，以及8-16%的非梯度胶。至于在蛋白适用性上，UnBlot并没有什么限定性，目前已有报告成功应用的例子包括20KD到160KD的蛋白。如果硬要说有的话，那就是UnBlot通用试剂盒目前只有小鼠和兔源、 生物 素3种选择（还有GST-tag融合蛋白的），如果你一抗不在此列，那么也就没有办法，乖乖的转膜，慢慢的摸索条件吧。 现在UnBlot参考价钱是“贵妃
有的话，那就是UnBlot通用试剂盒目前只有小鼠和兔源、生物素3种选择（还有GST-tag融合蛋白的），如果你一抗不在此列，那么也就没有办法，乖乖的转膜，慢慢的摸索条件吧。 现在UnBlot参考价钱是“贵妃级”的￥5000左右（打折幅度以各人能力为准，嘿嘿，7折也要3500呢），可用于1000cm2胶，说明书说可以用10次（10x8cm）Mini胶，不过我们知道一般Mini胶去掉积层胶后通常不过5cm高，其实用20次应该没问题的。由于包含了二抗和显色试剂，还居然有25张X光片和配套的显色工具盒
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