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硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书
SCD(HY-100234) RIA KIT
硬脂酰辅酶A 去饱和酶(stearoyl-coenzyme Adesaturase, SCD) 是催化饱和脂肪酸(saturated fattyacid, SFA) 第9 位碳链形成n-9 系单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acid, MUFA) 的关键酶。理论上其底物是十二碳到十八碳的饱和脂肪酸,实际在细胞内其底物以棕榈酸(C16:0) 和硬脂酸(C18:0) 为主。分别生成的棕榈油酸和油酸是磷脂和中性脂( 包
括甘油三酯和胆固醇酯等) 的重要组成部分。SCD 的调控作用与脂质代谢及胰岛素抵抗密切相关。
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书标本的收集:匀浆液,离心,取上清
反应原理:用碳14标记硬脂酸作为底物,加入一系列SCD酶促试剂,经酶作用后得到的产物,通过适当的分离,测定产物的脉冲数即可换算出酶的活力单位。
该药盒主要应用范围:
脂代谢方面的研究
药盒组成:(常温运输,4℃保存)
1. 缓冲液 1瓶
2. 酶促试剂 1瓶(含MgCL2,ATP,NADH、BSA、GSH、辅酶A)
3. 碳14标记硬脂酸 1瓶(溶于甲苯中)(Amershanm Biosciences)
4.闪烁剂 1瓶(含PPO、POPOP、甲苯、TrtionX-100)
5. 终止液 1瓶(含KOH、甲醇)
6.硬脂酸油酸溶液 1瓶
7.盐酸溶液 1瓶
8、三氯化硼甲醇溶液 1瓶
9.正己烷溶液(9:1) 1瓶
10.硅胶板 1块
11.展开剂 1瓶
12.2,7二氯荧光素乙醇溶液 1瓶
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书 测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
SCD RIA加液程序 (单位: ul )
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试 剂 T NSB 样 品
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缓 冲 液 —— 200 100
样 品 —— —— 100
酶促试剂 100 100 100
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摇匀,37度5分钟
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标记物 5 5 5
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混匀,37度10分钟后
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终止液 100 100 100
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硬脂酸油酸 5 5 5
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80度水浴30分钟
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盐酸溶液 100 100 100
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混匀 室温10分钟
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三氯化硼甲醇100 100 100
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80度水浴30分钟
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正己烷 300 300 300
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振荡,离心萃取,取上层,重复两次,并在氮气下吹干
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正己烷 100 100 100
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取10微升上述溶液放在硅胶板点样,进行薄层层析,
将薄板上的油酸甲酯的位置上的硅胶粉放到闪烁瓶中,上机,测CPM值。
硬脂酰辅酶A去饱和酶放免试剂盒说明书 结果计算:
酶活力=饱和脂肪酸的单不饱和脂肪酸的放射活性的量
(每毫克酶蛋白每分钟形成多少纳摩尔的油酸 oil nmol/min/mg protein)
注意事项:
薄板层上硅胶粉油酸甲酯放射性位置的确定:点样1小时以后,用2,7二氯荧光素乙醇液喷,在紫外灯下,油酸甲酯酯位置发出荧光,确定其位置,将此位置上的硅胶粉取出称重,然后放到闪烁瓶中进行测量。(确定位置时应稍大于荧光标识面积,以避免移取过程中损失)
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文献和实验)。而就种类来说,UnBlot也可以用于3-8%,4-12%,8-18%,4-20% 和 10-20%的梯度胶,以及8-16%的非梯度胶。至于在蛋白适用性上,UnBlot并没有什么限定性,目前已有报告成功应用的例子包括20KD到160KD的蛋白。如果硬要说有的话,那就是UnBlot通用试剂盒目前只有小鼠和兔源、 生物 素3种选择(还有GST-tag融合蛋白的),如果你一抗不在此列,那么也就没有办法,乖乖的转膜,慢慢的摸索条件吧。 现在UnBlot参考价钱是“贵妃
有的话,那就是UnBlot通用试剂盒目前只有小鼠和兔源、生物素3种选择(还有GST-tag融合蛋白的),如果你一抗不在此列,那么也就没有办法,乖乖的转膜,慢慢的摸索条件吧。 现在UnBlot参考价钱是“贵妃级”的¥5000左右(打折幅度以各人能力为准,嘿嘿,7折也要3500呢),可用于1000cm2胶,说明书说可以用10次(10x8cm)Mini胶,不过我们知道一般Mini胶去掉积层胶后通常不过5cm高,其实用20次应该没问题的。由于包含了二抗和显色试剂,还居然有25张X光片和配套的显色工具盒
抗原的检出强度将逐渐降低。 2) 组织脱水、透明、浸蜡 组织经固定后进行脱水、透明、浸蜡和包埋。掌握的原则是脱水透明要充分但不能过,浸蜡时间要够,温度不能高,否则造成组织的硬脆使组织切片困难,即使能切片,由于组织的硬脆,也使切片不能完好平整,染色过程中极易脱片,对免疫组化染色抗原的定位及背景都不利,所以无水酒精脱水和二甲苯透明的时间不宜过长,正常大小的组织无水酒精脱水lh×3次,二甲苯透明lh×2次即可,浸蜡及包埋石蜡温度不要超过65℃。
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