100K超滤管，1.5ml

干货：外泌体的细胞摄取实验报告

/孔 实验内容： 1. 外泌体荧光标记并去除游离染料 1.1. 用 PBS 将提取的外泌体浓度调整到约 1×1011Particles /mL 1.2. 配制染色孵育体系 1.3. 去除游离染料 染色完成后，于生物安全柜中加入 600μL PBS 在样品里，使用 100 KDa 超滤管，以 3000 ×g 的离心力离心 5 ~10 min， 进行超滤置换，去除溶液中游离的染料，将上室样品浓缩至原体积 重复置换 2 次 收集超滤管上室的样本, 送检 NTA(50μl)、BCA(50μl

干货：外泌体研究实操中的常见问题解答

和数量充足，干细胞/原代细胞上清可在提取前采用超滤管（100KD）浓缩 3~5 倍后再提取。 3、使用EPF柱时堵塞如何处理？ 答：过滤柱的孔径在 220nm 左右。如果出现堵塞情况，可以将柱子旋转 180 度再次离心。若上室还有残留液体，需要使用新的 EPF 柱，该柱子可以单独购买（货号 UR90102）。 4、沉淀法的具体原理是什么？ 答：将高亲水性聚合物（聚乙二醇等）添加到含外泌体的溶液中后，外泌体周围的水分子被聚合物束缚，降低了外泌体的溶解度并诱导其随后的沉淀，使外泌体在低速离心下可以很容易

影响蛋白超滤的因素以及使用超滤膜的注意事项

，如果希望100%截留某个蛋白，一般膜孔径选择为目标蛋白的1/3-1/5。 (八)问题：用10KD，15ml的超滤管超滤含20KD目的蛋白的蛋白溶液，会不会有目的蛋白穿过滤膜呢，我同学用这个超滤管超滤17KD的蛋白液，竟然有目的蛋白透过滤膜 可能会有一定的透过损失，因为截留和分子的形状也有关系。 为了100%截留, 超滤膜的截留分子量最好是目的蛋白的1/3比较保险 (九)问题：我们公司需要的是通过超滤管的那部分液体，将我们的产品分离，我说的超滤液就是指离心