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文献和实验和数量充足,干细胞/原代细胞上清可在提取前采用超滤管(100KD)浓缩 3~5 倍后再提取。 3、使用EPF柱时堵塞如何处理? 答:过滤柱的孔径在 220nm 左右。如果出现堵塞情况,可以将柱子旋转 180 度再次离心。若上室还有残留液体,需要使用新的 EPF 柱,该柱子可以单独购买(货号 UR90102)。 4、沉淀法的具体原理是什么? 答:将高亲水性聚合物(聚乙二醇等)添加到含外泌体的溶液中后,外泌体周围的水分子被聚合物束缚,降低了外泌体的溶解度并诱导其随后的沉淀,使外泌体在低速离心下可以很容易
,如果希望100%截留某个蛋白,一般膜孔径选择为目标蛋白的1/3-1/5。 (八)问题:用10KD,15ml的超滤管超滤含20KD目的蛋白的蛋白溶液,会不会有目的蛋白穿过滤膜呢,我同学用这个超滤管超滤17KD的蛋白液,竟然有目的蛋白透过滤膜 可能会有一定的透过损失,因为截留和分子的形状也有关系。 为了100%截留, 超滤膜的截留分子量最好是目的蛋白的1/3比较保险 (九)问题:我们公司需要的是通过超滤管的那部分液体,将我们的产品分离,我说的超滤液就是指离心
• Transfer immediately to a 250 ml bottle on ice and add 60 ml Solution II, followed by 45 ml Solution III. Immediately spin in the Sorvall GSA rotor at 10K for 10'. • Transfer the supernatant to a clean 250 ml bottle and spin for 10' at 10K (optional
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