免疫荧光细胞流式仪基础检测试剂盒（无一抗和二抗）

免疫荧光标记样品

。 本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直接荧光抗体标记试剂成本较高。但减少了间接标记法中较强的非特异荧光干扰，因此更适用于临床标本的检测。 2．间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液（浓度约5×106 个/ml），加入特异性第一抗体，4℃孵育15～30分钟，待反应完全后用磷酸缓冲液洗去未结合抗体，吸尽残留液体，再加入荧光标记第二抗体，4~C孵育30分钟，生成抗原―抗体―抗抗体复合物，洗涤后即可上机检测。注意：在整个荧光标记过程中均需参考免疫荧光

免疫荧光技术基本原理

抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。2．技术分类： ⑴ 荧光抗体技术（荧光显微镜技术）　　抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果的检测方法。 ⑵ 免疫荧光测定技术：　　抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测

进阶：6 年免疫组化经验总结

、封闭血清的选择原则是什么？ 1、膜上或切片上有剩余的位点可以非特异性吸附抗体，造成后续结果的假阳性。   2、封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合，否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合，会造成背景。   3、也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。   五、抗体孵育条件的比较？ 1、一抗孵育温度有几种：4ºC、室温、37ºC，其中 4ºC 效果最佳；孵育时间：这与温度、抗体浓度有关，一般 37ºC 1-2 h，而 4ºC