♦ Oligo d(T)25磁珠 ♦裂解/结合缓冲液 ♦冲洗缓冲液I, II, III ♦洗脱缓冲液
通过以下poly(A)+提取实验验证了提取的RNA一致性和分离结合的一致性,并具有较宽分离范围:首先将递减的HEPG2细胞(从5 x 105到1 x 10 3),直接在微量滴定板上进行裂解/结合,然后加入磁珠分离mRNA。使用ProtoScript第一链cDNA合成试剂盒(NEB #E6500),以oligo(dT)为引物将mRNA的十分之一,反转录成cDNA。并使用特异引物qPCR肽基脯氨酰异构酶来检测这个低丰度的管家基因。
参考文献
(1) Wu, N. et al. (2004) Mol. Biotech., 27, 119–125.
(2) Daldoul, S. et al. (2008) Anal. Biochem., 372, 148–155.