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文献和实验一、原理与意义免疫荧光组织(细胞)化学染色方法——直接法,是一种荧光抗体染色法。该方法比较简单,适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白质抗原如肾、皮肤的检查和研究。此法每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原,特异性高而敏感性较低。二、操作流程1、染色:切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),在室温或37℃染色30min,切片置入能保持潮湿的染色盒内,防止干燥。2、洗片:倾去存留的荧光抗体,将切片浸入pH
蛋白质,加酶标抗抗体,保温后洗涤,加底物保温30分钟后,加酸或碱终止酶促反应,用目测或光电比色测定抗体含量。三、仪器、原料和试剂仪器聚苯乙烯96孔酶标板、微量移液管、酶联免疫阅读仪、水浴锅。原料单克隆抗体试剂1、 抗原及酶标记抗体①抗原:兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG,Code No.A0423);②酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP,Code No.P0260);均为DAKO 公司产品,使用时按照说明书要求稀释。4、 洗涤
1. 抗原及酶标记抗体 ①抗原:兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG,Code No.A0423); ②酶标抗抗体:兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP,Code No.P0260);均为 DAKO 公司产品,使用时按照说明书要求稀释。 4. 洗涤液(含0.05%Tween 20的PBS):1LPBS 中加入Tween-20 500μL。 5. 封闭液(含1%牛血
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