2*Taq PCR MasterMix（含染料）

PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶

酶。 图 1.非特异性扩增（左图）与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增（右图）。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液，您只需添加模板和引物，然后，开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤，使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样（注意：确保染料与下游应用兼容）。直接

PCR各处应用模式

鉴定。彩色PCR（Color complement assay）直译为“着色互补性检测”，是LP-PCR的一种，彩色PCR意译更为明确：它用荧光染料标记引物的5’端。荧光染料JOE和FAM呈绿色荧光；TAMRA呈红色荧光；COUM呈蓝色荧光。不同荧光标记的引物同时参加反应，扩增后的目的基因会分别带有引物5’端的染料，通过电泳或离心沉淀，肉眼就可以根据不同荧光的色泽判断目标基因是否存在及扩增基因的类型。通常仅需2种不同颜色的引物，一种作为基因检测引物；另一种作为控制条件的内对照，即可诊断基因

Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手

操作。 3. 每管或每孔都要换新枪头！不要连续用同一个枪头加样！ 4. 所有成分加完后，离心去除气泡。 5. 每个样品至少 3 个平行孔。 参比或者校正染料（reference dye，passive dye）常用的是 ROXTM （现在已经是ABI的注册商标了！）或者其他染料，只要不影响检测 PCR 产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非 PCR 震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把 ROXTM 配制在 MasterMix