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- 详细信息
- 用户评价
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-25~-15℃长期保存，2~8℃保存3个月未检测出PCR性能或酶活性的下降
- 英文名：
2×T5 Super PCR Mix（PAGE）
- 库存：
充足
- 供应商：
北京擎科生物科技股份有限公司
- 规格：
5×1.0 mL
2×T5 Super PCR Mix（PAGE）
PAGE专用PCRmix，极速延伸（5~10s/kb）
【产品简介】
PAGE专用PCRmix，极速延伸（5~10s/kb）
本产品专为短串联重复序列的扩增而设计，适用干1 kb以内片段的扩增。产品采用了独特的双组分DNA聚合酶，即改造的T5 DNA Polymerase及只有3'-5'核酸外切酶活性的T6 DNA Polymerase，其中前者在野生型Taq DNA聚合酶的DNA聚合酶活性区域543、615、660、664、680、681等氨基酸位点进行了突变改造，提高了对粗模板的耐受能力及对高GC模板的扩增能力，降低了dNTPs的掺入效率以保证重复序列处扩增的准确性，，同时融合具有持续合成能力的DNA结合结构域Sso7d，大幅度提高了反应速度及稳定性，配合精心优化的缓冲体系，既解决了多重复序列扩增时容易产生插入/缺失突变的问题，同时又具有高保真的优点，保真度为野生型Taq DNA聚合酶的6倍。
本产品为2×浓度的快速扩增PCR预混液，已包含合适浓度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。产品中包含上样缓冲液，不包含核酸染料，扩增产物无需额外添加Loading Buffer即可直接点样电泳。本产品扩增产物3'端为平末端。
本产品为2×浓度的快速扩增PCR预混液，已包含合适浓度的Mg2+、DNA聚合酶和dNTPs，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应。产品中包含上样缓冲液，不包含核酸染料，扩增产物无需额外添加Loading Buffer即可直接点样电泳。本产品扩增产物3'端为平末端。
【产品特点】
高度识别短串联重复序列：在短串联重复序列处不产生插入/缺失突变；
超快的延伸速度：快速扩增型T5 DNA Polymerase，延伸速度为10 s/kb；
极强的耐热性：98℃热处理1 h酶活性无明显变化；
优异的稳定性：优化的反应缓冲液，扩增高效、稳定。
【适用范围】
适用于短串联重复序列的扩增，也可用干其他短片段的扩增。
【产品组成及保存】
5×1.0 mL; -25~-15℃保存2年。
【注意事项】
本产品不推荐用于长片段扩增。
PCR Mix应避免反复冻融，短期内多次使用可置干2~8℃保存。使用前，Mix 解冻后应充分混匀。
【操作流程】
1. 在PCR管中配制如下反应液，混匀短暂离心后，上机反应。
| 50 µL 体系 | |
| 2×T5 Super PCR Mix（PAGE） | 25 µL |
| 10 µM Primer F | 2 µL |
| 10 µM Primer R | 2 µL |
| Template DNA | ＜ 1 µg |
| ddH2O | Up to 50 µL |
| 温度 | 时间 | 循环次数 | ||
| 1 | 预变性 | 98 ℃ | 2~3 min | 1 cycle |
2 |
变性 | 98 ℃ | 10 s | 25~35 cycles |
| 退火 | Tm±2 ℃ | 10 s | ||
| 延伸 | 72 ℃ | 5~15 s/kb | ||
| 3 | 终延伸 | 72 ℃ | 5~10 min | 1 cycle |
【问题讨论】
Q1：什么是STR/SSR？
A1：微卫星标记（Microsatellite）也称短串联重复序列（Short Tandem Repeat，STR）或简单重复序列（Simple Sequence Repeat，SSR），是广泛分布于真核生物基因组中的简单重复序列。一般由2~6个碱基串联重复排列，重复次数大多在10~60次之间。因为SSR自身具有高度的变异性，核心序列及重复数目，不同品种和个体之间常常具有多态性。
基因组中某一特定的STR侧翼序列通常是保守性较强的单一序列，且序列简短，因此通过设计特异性的引物，PCR很容易从基因组DNA中特异性地扩增出每个位点的SSR序列，通常200~500 bp之间，扩增产物可以通过PAGE电泳、毛细管电泳或者二代测序来检测。
PAGE电泳简便、快速、灵敏、成本低，但只适合用于单个基因座或几个扩增产物片段长度不重叠的基因座的检测。毛细管电泳操作简便，利用ABI 3730xl遗传分析仪对荧光标记的DNA片段进行检测，更加高效快捷、精确，同时适合多个位点的混合检测。二代测序进行SSR检测，可以获得更高水平基因多态性结果。大多数SSR是非编码序列，有时可以影响基因表达、剪接、蛋白序列及基因组结构等。目前SSR分析已广泛应用于遗传制图、连锁性分析、亲子鉴定、疾病基因定位和物种多态性研究等诸多领域。
Q2：扩增STR/SSR的DNA聚合酶有什么特殊要求吗？
A2：STR/SSR是短片段重复序列，普通Taq酶在多重复序列处扩增时很容易产生插入/缺失突变，使产物比实际模板少或者多一个甚至几个重复，这种现象也被成为STR扩增滑脱，在STR分型图中，在目标基因峰左侧或者右侧出现信号较弱的影子峰（Stutter）这对STR分型和研究是致命的错误。
要减少影子峰的影响，需要使用扩增活性强的DNA聚合酶，比如2×T5 Super PCR Mix（PAGE），或减少DNA模板，降低电泳上样量来降低信号强度，也可通过提高退火温度等操作来优化扩增条件。
Q3：2×T5 Super PCR Mix（PAGE）产品扩增的PCR产物适用于琼脂糖电泳吗？
A3：可兼容琼脂糖电泳。
【实例分享】
1.玉米基因组为模板扩增，并用 PAGE 检测，背景干净清晰。
2. 以棉花基因组为模板扩增，并用 STR 检测，与普通Taq 酶扩增相比，杂峰明显减少。
本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗。
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