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- 2025年07月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
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北京鼎国
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箱
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文献和实验液体培养基，挑单克隆于离心管中，37℃，250rpm，培养过夜。 3.第三天取200µl小摇后的菌液接种于250ml 含AMP的LB液体培养基中，37℃，250rpm培养6 hr左右，使OD值达到0.6-0.8。 4.将菌液移入250ml离心管中， 4℃，3000rpm，离心15min。取出离心管，菌团朝上倒掉上清，将离心管倒置于吸水纸上使上清充分滤干。（注意离心前需配平） 5.加入10ml溶液Ⅰ（50mM Glucose ， 25mM Tris-HCl，10mM EDTA， pH8.0），加入RNase
取样器将反应物充分混合后，加 20μl 石蜡油覆盖。 3.2 热循环反应 该反应中降温时间非常关键（约1℃／s）。因此，可使用Perkin-Elmer 序列的热循环仪（PCR 仪，如 480，2400 或 9600）。以下所描述的操作均基于Perkin-Elmer Model 480 热循环仪。将反应管放入热循环仪中，按以下程序进行热循环反应： （1）96℃ 1 秒钟 96℃ 30 秒钟 （2）50℃ 1 秒钟 50℃ 1 分钟
D. 室温下，离心收集菌体（1500 r/min，5 min），重悬于10 mL Solution I中； E. 再次离心，弃尽上清，菌体沉淀重悬于1 mL Solution II中； F. 将制备的感受态细胞分装为50 µL/管，直接用于转化或-80℃保存备用。 2) 重组载体对酵母的转化 A. 室温下融化一管酵母感受态细胞，加入1 µg重组质粒，轻轻混匀，注意加入DNA溶液的体积不要超过
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