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- 文献和实验
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314
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北京鼎国
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箱
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文献和实验药物的介质,而加药组加入不同浓度的药物。8.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。实验步骤贴壁细胞:1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。2.5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
。 用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。 二、实验步骤 (一)贴壁细胞 1. 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100 ul,铺板使待测细胞调密度至1 000-10 000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。 2. 5%CO2,37 ℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
分别为0.3%双氧水和0.3%Triton X-100混合而成。配制方法是先用微波加热的36 ml PBS,再接着加120 ul Triton X-100,并加热一会儿,冷却至临用前加0.4 ml 30%H2O2。4、5%羊血清或封闭血清,用PBS稀释。5、含0.03%H2O2的0.05%DAB(避光):用20×DAB(1%,10 mg/ml)5 ul+0.1 ul 30% H2O2+95 ul PBS。6、一抗用PBS稀释(也可用抗体稀释液),二抗用中杉金桥的SP染色试剂盒。7、Xylene、梯度
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