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- 文献和实验
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214
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北京鼎国
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箱
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文献和实验科研君们,当埋头实验几月找到了目标基因片段,电泳时条带却突然消失了;千辛万苦分离纯化的物质,色谱图中却意外出现杂质峰,苦苦查询,可能仍找不到问题原因。若问题只在小小的吸头上,科研君的心还能淡定吗? 吸头的问题在哪里,如何保证纯净无污染的吸头?需要考虑以下几方面因素: 一、 吸头材质 吸头市场上,原材料基本都是聚丙烯塑料(低吸附,化学惰性高,使用温度范围广,无色透明)。也许大家不知道的是,同样是聚丙烯,品质会有大的差别。高品质的吸头一般采用天然 100% 纯聚丙烯,而低廉的吸头则很多
: (1)移液枪:200ul、10ul (2)吸头:200ul、20ul (3)EP管1.5ml、100ul (4)水浴箱 2,实验器具的处理与准备 塑料制品:(包括吸头、EP管等) 将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中(必要时小枪头需要用吸管打入DEPC水)37℃过夜,然后送至高压3次,后在80℃烘烤箱中烘干(或置于37℃中8小时左右烘干),试验前将枪头放入吸头台。 3,试剂配制和准备: (1)DEPC水:泡实验器具的DEPC水的配制:1000ml双蒸水中加1mlDEPC,放在1000ml
7.5)、5mmol/L MgCl2 、1%Triton –X 100],轻轻上下振荡至透明,红细胞 完全溶解。 (3)冰浴10min,离心,3000rpm,10min。弃上清,STMT重复处理1~3次。 (4)弃上清,白色沉淀物加10ml STE[0.1mol/L NaCl、10mmol/l Tris-HCl(pH8.0)、1mmol/L EDTA(pH8.0)],先少量,充分混匀,然后加10mg/ml蛋白酶K100μl,20%SDS30μl,摇匀,置37℃水浴15~20h。 (5)用等体积饱和
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