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- 详细信息
- 文献和实验
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232
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北京鼎国
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箱
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文献和实验取样器将反应物充分混合后,加 20μl 石蜡油覆盖。 3.2 热循环反应 该反应中降温时间非常关键(约1℃/s)。因此,可使用Perkin-Elmer 序列的热循环仪(PCR 仪,如 480,2400 或 9600)。以下所描述的操作均基于Perkin-Elmer Model 480 热循环仪。将反应管放入热循环仪中,按以下程序进行热循环反应: (1)96℃ 1 秒钟 96℃ 30 秒钟 (2)50℃ 1 秒钟 50℃ 1 分钟
液体培养基,挑单克隆于离心管中,37℃,250rpm,培养过夜。 3.第三天取200µl小摇后的菌液接种于250ml 含AMP的LB液体培养基中,37℃,250rpm培养6 hr左右,使OD值达到0.6-0.8。 4.将菌液移入250ml离心管中, 4℃,3000rpm,离心15min。取出离心管,菌团朝上倒掉上清,将离心管倒置于吸水纸上使上清充分滤干。(注意离心前需配平) 5.加入10ml溶液Ⅰ(50mM Glucose , 25mM Tris-HCl,10mM EDTA, pH8.0),加入RNase
轻触凝胶,检查是否成胶。 B-PEG细胞不可降解交联剂交联:混合液会持续液态10分钟之久,才会开始形成凝胶。开始成胶后,混合物就会变得不可抽吸。可利用这段时间将混合液转入合适的无菌培养皿*中,不过在胶凝开始前,需要混合或搅动来重悬细胞,确保细胞会悬浮在凝胶中。完成胶凝约需50分钟孵育时间。加入细胞培养基之前,可用吸头轻触凝胶,检查是否成胶。 * 培养器皿可选择多孔板(6、24、96孔)或任意的无菌培养板或培养瓶。推荐使用未经组织培养处理的聚苯乙烯。如需细胞成像,建议采用带细胞培养腔室的载玻片
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