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166
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北京鼎国
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箱
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文献和实验Buffer R-A,适当匀浆后收集合并到1.5ml 离心管。 (d)用带4~6 号针头的1ml 注射器反复吸注10次。 匀浆充分与否是决定RNA 和DNA 得率的关键。匀浆完全时,溶液不再粘稠,很容易从注射器针头上呈不连续滴状滴落,而非连续状。 2.吸取0.4ml 匀浆液转入另一1.5 ml 离心管中,若匀浆体积不足 0.4ml,加Buffer R-A 补充至0.4ml。 3.加0.15ml Buffer R-E,盖紧离心管,旋涡振荡混合均匀或或用步骤1 中使用的注射器反复吸注2~3次
[实验步骤] (一) 提取质粒 1.将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到试管中,接入含质粒的大肠杆菌,37℃振荡培养过夜。 2.取1.5ml培养物倒入微量离心管中,4000rpm,离心2min。 3.吸去培养液,使细胞沉淀尽可能干燥。 4.将细菌沉淀悬浮于100μl溶液Ⅰ中,充分混匀,室温放置10 min。 5.加200μl溶液Ⅱ(新鲜配制),混匀内容物,将离心管放冰上5 min。 6.加入150μl
上盖和下盖,将凝胶柱放入一个配置好的洗脱管中,让多余液体流出。 (5)倒去液体,将柱连同洗脱管一起在 3 000r/min 下离心 2 分钟。 (6)将柱放入一个1.5ml 离心管中,用微量取样器将测序反应物取出,注在凝胶柱中央。注意避免带入石蜡油。 (7)3 000r/min 下离心 2 分钟。应注意柱的定向必须与第一次离心时一致。 (8)将样品放在真空干燥离心机中干燥。 (9)将干燥后的样品贮存于―70℃下待进行电泳。在此条件下保存1 年之久的样品其荧光也不会猝灭
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