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北京鼎国
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文献和实验上盖和下盖,将凝胶柱放入一个配置好的洗脱管中,让多余液体流出。 (5)倒去液体,将柱连同洗脱管一起在 3 000r/min 下离心 2 分钟。 (6)将柱放入一个1.5ml 离心管中,用微量取样器将测序反应物取出,注在凝胶柱中央。注意避免带入石蜡油。 (7)3 000r/min 下离心 2 分钟。应注意柱的定向必须与第一次离心时一致。 (8)将样品放在真空干燥离心机中干燥。 (9)将干燥后的样品贮存于―70℃下待进行电泳。在此条件下保存1 年之久的样品其荧光也不会猝灭
,以免拔梳时把胶孔拔断)。由于凝胶在聚合过程中有回缩,所以应小心添加些胶液于梳子处,水平放置,室温聚合1hr。将封口玻璃胶带掀去,放入电泳槽,凹型玻璃贴紧电泳缓冲液槽,用大号固定夹固定住两侧。在上下电泳槽内灌入 1×TBE电泳缓冲液。小心取出点样梳,用槽内的缓冲液反复冲洗点样孔,以去除可能存在的未聚合的聚丙烯酸胺和气泡。 ⑶ 扩增产物的处理:将 PCR扩增产物与变性上样液按1:5的比例加入0.5ml 微量离心管中,混匀。样品上胶前应98 o C变性10min,立即冰浴骤冷。取约3~5μl变性
点样孔,以去除可能存在的未聚合的聚丙烯酸胺和气泡。 ⑶ 扩增产物的处理:将 PCR扩增产物与变性上样液按1:5的比例加入0.5ml 微量离心管中,混匀。样品上胶前应98 o C变性10min,立即冰浴骤冷。取约3~5μl变性样品(根据点样孔的大小决定上样量),以微量加样器上样,(上样时要注意不要有气泡冲散样品,而且速度要快,时间长了样品易于扩散)。 ⑷ 电泳:电泳槽接上电极(上槽接负极,下槽接正极)开启电源,根据扩增片段的大小及电泳槽和凝胶的大小,决定电泳的电压及电泳时间。通常室温
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