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文献和实验相关专题 蛋白Marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量
的,当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。 ① 宽分子量蛋白标准 如果从实验室总体考虑的,就选范围尽量宽,条带分布比较均匀的,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断,避免正好落在一段空白区的危险。不过条带越多,每次上样量也就越费。拿到Marker后,如果买的是大包装,就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险,不用多说吧。另外要记得,宽谱的Marker不一定每条都能看到的,特别是Mini Cell。如果侧重大蛋白,那小的可能就已经跑掉了,不是质量不好哦。 ② 高分子量
。 在某些情况下,可能想用印迹中的较高分子量区域来检测一种抗原,用另一个区域来检测另一不同分子量的蛋白质。为了使印迹中不同的区域正好对应于相应分子量的范围,这需要在对照泳道中加入已知分子量的蛋白质。这样可方便地在印迹中找到适当的区域并将其剪下。 使用预染的分子量标记,可为转印后切下所需印迹提供良好的指示,此类标记已商品化,但是比丽春红S染色法昂贵。标记中的颜色除了增加成本对实验并无不良影响,而且在泳动时非常漂亮。 用于免疫印迹染色
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