生物素标记的羊抗兔IgG（Biotinlabeledgoat

双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤

FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy

免疫组织化学基本原理

与第一抗体种属相同的抗体Fc段(有种属特异性)作为抗原免疫动物。制备抗抗体．即第二抗体，并标记第二抗体。例如，第一次使用的特异性抗体(一抗)是由家兔产生，则第二次使用的抗体(二抗)用酶标记或其他标记物标记抗兔的免疫球蛋白(常用酶标记羊抗兔lgG)。染色时，顺次以第一抗体和标记的第二抗体处理标本，在抗原存在部位形成抗原一第一抗体一标记的第二抗体复合物，以达到检测该抗原的目的。间接法因第二抗体的放大作用。敏感性大大增高。   三、亲豪和免负疫组织化学     亲和免疫组织化学是从酶桥法和过氧

免疫PCR(IM-PCR)

DNA发生反应。然后用酶标羊(或兔)抗鼠IgG抗体及相应底物进行显色。使用这一方法,可检测出单个抗原分子。材料与试剂包括: ①所测物的单克隆抗体(鼠)；②所测物的多克隆抗体(兔)；③生物素化羊抗鼠IgG；④生物素化羊抗兔IgG；⑤生物素化dUTP；⑥Klenow聚合酶；⑦PCR反应液；⑧引物(自行设计)；⑨生物素化DNA标记分子。