- ¥1200
- Biosntech
- 北京
- Lot141127
- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 库存：
大量
- 供应商：
Biosntech
- 规格：
10人份
产品简介
Y染色体上的精子生成因子（azoospermia factor，AZF）座位微缺失是男性原发性不育的一个重要遗传因素。AZF基因家族有AZFa、AZFb、AZFc三个区域，其中任何一个区域的微缺失都能导致精子生成障碍。
本产品根据欧洲生殖协会推荐标准进行设计，运用多重PCR技术快速检测Y染色体AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc三个区域中的6个序列标签位点（sequence tagged sites，STS），每个样品需做A组和B组两个多重PCR反应，A组包括sY254、sY127、sY86三个位点，B组包括sY134、sY84、sY255三个位点。每组设置两对扩增ZFY、SRY基因的引物，作为内对照。
注释 M：DNA Marker 600 从上到下分子量大小依次为600bp 500bp 400bp 300bp 200bp 100bp
AM：A组正常男性对照 AF：A组女性对照 A1：A组患者1
A2: A组患者2 A3: A组患者3
BM：B组正常男性对照 BF：B组女性对照 B1：B组患者1
B2：B组患者2 B3：B组患者3 －： 空白阴性对照
AM、BM：正常男性对照； A1、B1：AZFa区缺失；
A2、B2：AZFc区缺失； A3、B3：AZFa+b+c 3区全缺失
试剂盒组成：
| 产品名称 | Lot B141127 10人份 |
Lot B141128 20人份 |
保存条件 |
| A组反应液 | 550ul | 1.1ml | -20℃ |
| B 组反应液 | 550ul | 1.1ml | -20℃ |
| 男性对照DNA | 100ul | 200ul | 4℃ |
| 女性对照DNA | 100ul | 200ul | 4℃ |
| 去离子水 | 500ul | 1ml | 4℃ |
| 说明书 | 1份 | ||
操作步骤
1．根据实验室习惯可采用不同方法提取外周血基因组DNA，用分光光度计测其浓度，最后将DNA稀释成20-100ng/ul，以备PCR扩增。
2．按以下反应体系配备试剂：25ul体系
| A组 | B组 | ||
| A组反应液 | 15ul | B组反应液 | 15ul |
| DNA模板 | 200-500ng | DNA模板 | 200-500ng |
| 去离子水 | 补至25ul | 去离子水 | 补至25ul |
3．按以下反应条件进行PCR扩增
94℃ 5′；｛94℃ 30″；55℃ 30″；65℃ 4′；25个循环｝，65℃ 5′；4℃，保存。
4．琼脂糖凝胶电泳
直接取PCR产物10μl 于3%琼脂糖凝胶电泳30-40分钟。
5．结果分析
正常男性标本Ａ组和Ｂ组扩增电泳条带如下，ZFY、SRY,为对照。
| A组 | 产物大小 | 区域 | B组 | 产物大小 | 区域 |
| ZFY | 495bp | ZFY | 495bp | ||
| SRY | 472bp | SRY | 472bp | ||
| sY254 | 400bp | AZFc | sY84 | 326bp | AZFa |
| sY86 | 320bp | AZFa | sY134 | 301bp | AZFb |
| sY127 | 274bp | AZFb | sY255 | 126bp | AZFc |
注意事项
收到试剂盒后，请将A组反应液、B组反应液分装成若干份，避免反复冻融，使其成分降解。
一、男性不育症患者Y染色体微缺失分子筛查适应症
（一）常规检测的适应症：
1、男性不育症患者选择单精子卵泡浆内注射（ICSI）或体外受精（IVF）生育子代前；
2、非梗阻性无精子症患者；
3、严重少精子症患者（精子数目少于5×106/ml）；
4、无精子症患者进行睾丸活检术前；
5、男性不育症患者（如精索静脉曲张）手术前；
6、原因不明的男性不育症患者用药前。
（二）推荐检测的适应症：
1、少精子症患者（精子数目少于20×106/ml）；
2、精子密度正常，但原因不明的男性不育症患者；
3、男性不育伴隐睾和精索静脉曲张的患者；
4、妻子有不明原因习惯性流产的患者。
二、Y染色体微缺失分子检测的临床意义
Y染色体微缺失遗传型与表型的关系已进行了大量研究，对临床有非常好的指导意义。
AZFa、AZFb和AZFc三个区域全部缺失的患者，100％表现为无精子症。不可能通过任何手段从睾丸中获得精子。
AZFa区域整段缺失通常导致唯支持细胞综合征（SCO综合征），临床表现为无精子症。如果诊断为整段AZFa区域缺失，若想从睾丸中获得精子进行ICSI已不大可能。
AZFb和AZFb+c整段缺失的典型睾丸组织学特征是SCO综合征或生精阻滞。与AZFa区域整段缺失的情况类似，这种病人在睾丸穿刺时也找不到精子。因此，不推荐给这类病人施行ICSI。
AZFc缺失的临床和睾丸组织学表型多种多样。一般说来，AZFc缺失患者尚残存精子生成能力。AZFc缺失见于无精子症或严重少精子症患者，罕见情况下，也可以在自然状态下遗传给其男性后代。在无精子症患者中，AZFc缺失者通过TESE获得精子的机会要大得多，也可以进行ICSI受孕。但这些患者的男性子代将是AZFc缺失的携带者。
另外，有研究发现AZFc区域缺失的少精子症患者，其精子数目有进行性下降的趋势，最后发展为无精子症。因此，对AZFc区域缺失的少精子症患者,应及早进行治疗或将其精液进行冷冻保存。
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