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LabAssay™ Creatinine
LabAssay™ 肌酐检测试剂盒
肌酐是在肌肉和神经中由磷酸肌酸直接产生或通过肌酸脱水产生的物质。肌酐作为代谢废物，被肾小球过滤并排出体外。本产品为通过Jaffé 反应的高特异性肌酐检测试剂盒，可通过微孔板法检测小鼠血清和尿液中的肌酐。
◆检测原理
向样品中加入去蛋白试剂并沉淀后，取上清。当 kǔ wèi 酸作用于该上清时，样品中的肌酐在碱性溶液中与 kǔ wèi 酸反应产生橙红色的缩合物（即Jaffé反应）。通过测定这种橙红色的吸光度，可计算样品中肌酐的含量。
◆试剂盒组成
1．去蛋白试剂——150 mL×1瓶
2．kǔ wèi 酸试剂（kǔ wèi 酸 22 mmol/L）——50 mL×1瓶
3．0.75 mol/L氢氧.化钠溶液——50 mL×1瓶
4．10 mg/dL肌酐标准溶液——15 mL×1瓶
◆试剂盒性能
● 标准曲线范围：2.5～10 mg/dL（mg/100mL）
● 检测时间：约40 min
● 样品：血清、血浆（小鼠、大鼠、人）
● 所需样品量：50 μL
● 测定波长：520 nm
◆标准曲线示例
◆检测操作方法
微孔板法
根据下表条件进行反应。
|
Tests |
标准 |
空白 |
|
|
第一步操作在样品管内完成 |
|||
|
样品 |
样品50 μL |
标准溶液50 μL |
蒸馏水50 μL |
|
去蛋白试剂 |
300 μL |
300 μL |
300 μL |
|
充分混合。在室温静置10 min。以大于2500 rpm的转速离心10 min。 后续操作在孔板中进行。 |
|||
|
上 清 |
100 μL |
100 μL |
100 μL |
|
在25℃～30℃下静置 |
|||
|
kǔ wèi 酸试剂 |
50 μL |
50 μL |
50 μL |
|
0.75mol/L氢氧.化钠溶液 |
50 μL |
50 μL |
50 μL |
|
在25℃～30℃下静置20 min。 以空白为对照，30 min内测定样品及标准溶液的吸光度（波长：520 nm） |
|||
◆数据
加标回收测试
肌酐的加标回收测试，将已知含量的标准品加标到人、小鼠、大鼠样品中，n=2。
人样品
|
人样品 |
添加量（mg/dL） |
实测值（mg/dL） |
回收量（mg/dL） |
回收率 (%) |
|
血清样品 |
－ |
3.68 |
－ |
－ |
|
2.71 |
6.37 |
2.7 |
99.6 |
|
|
3.55 |
7.1 |
3.42 |
96.3 |
|
|
4.21 |
7.55 |
3.87 |
91.9 |
|
|
血浆样品（EDTA） |
－ |
3.43 |
－ |
－ |
|
3.3 |
6.47 |
3.04 |
95.2 |
|
|
4.33 |
7.39 |
3.96 |
91.5 |
|
|
5.13 |
7.69 |
4.26 |
83 |
|
|
血浆样品（肝素） |
－ |
3.37 |
－ |
－ |
|
3.31 |
6.97 |
3.6 |
109 |
|
|
4.34 |
7.86 |
4.49 |
103 |
|
|
5.14 |
8.21 |
4.84 |
94.2 |
小鼠样品
|
小鼠样品 |
添加量（mg/dL） |
实测值（mg/dL） |
回收量（mg/dL） |
回收率 (%) |
|
血清样品 |
－ |
2.68 |
－ |
－ |
|
3 |
5.9 |
3.22 |
107 |
|
|
5.14 |
8.08 |
5.4 |
105 |
|
|
6.74 |
8.9 |
6.22 |
92.3 |
|
|
血浆样品（EDTA） |
－ |
3.14 |
－ |
－ |
|
2.71 |
5.63 |
2.49 |
91.9 |
|
|
4.65 |
7.74 |
4.6 |
98.9 |
|
|
6.1 |
8.25 |
5.11 |
83.8 |
|
|
血浆样品（肝素） |
－ |
3.01 |
－ |
－ |
|
2.85 |
5.48 |
2.47 |
86.7 |
|
|
4.88 |
7.74 |
4.73 |
96.9 |
|
|
6.41 |
8.6 |
5.59 |
87.2 |
大鼠样品
|
大鼠样品 |
添加量（mg/dL） |
实测值（mg/dL） |
回收量（mg/dL） |
回收率 (%) |
|
血清样品 |
－ |
2.86 |
－ |
－ |
|
3.27 |
5.61 |
2.75 |
84.1 |
|
|
5.6 |
8.13 |
5.27 |
94.1 |
|
|
7.35 |
9.34 |
6.48 |
88.2 |
|
|
血浆样品（EDTA） |
－ |
2.78 |
－ |
－ |
|
2.79 |
5.22 |
2.44 |
87.5 |
|
|
4.78 |
8.3 |
5.52 |
115 |
|
|
6.27 |
9.22 |
6.44 |
103 |
|
|
血浆样品（肝素） |
－ |
2.88 |
－ |
－ |
|
3.17 |
5.53 |
2.65 |
83.6 |
|
|
5.43 |
8.25 |
5.37 |
98.9 |
|
|
7.13 |
9.27 |
6.39 |
89.6 |
◆样品检测示例
人样品
|
测定值（mg/dL） |
平均值 |
SD |
CV（%） |
||
|
人血清 |
3.69 |
3.67 |
3.68 |
0.012 |
0.33 |
|
人血浆（EDTA） |
3.43 |
3.44 |
3.43 |
0.0071 |
0.21 |
大鼠血清
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值 |
SD |
CV（%） |
备注 |
|
|
1 |
0.553 |
0.546 |
0.55 |
0.0049 |
0.9 |
参考值 |
|
2 |
0.716 |
0.824 |
0.77 |
0.076 |
9.9 |
参考值 |
|
3 |
1.12 |
1.26 |
1.19 |
0.095 |
8 |
参考值 |
|
4 |
1.22 |
1.29 |
1.25 |
0.05 |
4 |
参考值 |
|
5 |
1.04 |
0.994 |
1.01 |
0.029 |
2.9 |
参考值 |
大鼠血浆（EDTA）
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值 |
SD |
CV（%） |
备注 |
|
|
1 |
0.319 |
0.288 |
0.304 |
0.022 |
7.2 |
参考值 |
|
2 |
0.638 |
0.627 |
0.633 |
0.0078 |
1.2 |
参考值 |
|
3 |
0.824 |
0.871 |
0.848 |
0.033 |
3.9 |
参考值 |
|
4 |
0.661 |
0.681 |
0.671 |
0.014 |
2.1 |
参考值 |
|
5 |
0.205 |
0.233 |
0.219 |
0.02 |
9 |
参考值 |
小鼠血清
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值 |
SD |
CV（%） |
备注 |
|
|
1 |
0.199 |
0.205 |
0.202 |
0.0042 |
2.1 |
参考值 |
|
2 |
0.492 |
0.507 |
0.5 |
0.011 |
2.1 |
参考值 |
|
3 |
0.734 |
0.722 |
0.728 |
0.0085 |
1.2 |
参考值 |
|
4 |
0.641 |
0.716 |
0.679 |
0.053 |
7.8 |
参考值 |
|
5 |
0.192 |
0.219 |
0.206 |
0.019 |
9.3 |
参考值 |
小鼠血浆（EDTA）
|
序号 |
测定值（mg/dL） |
平均值 |
SD |
CV（%） |
备注 |
|
|
1 |
0.095 |
0.103 |
0.099 |
0.0057 |
5.7 |
参考值 |
|
2 |
0.607 |
0.559 |
0.583 |
0.034 |
5.8 |
参考值 |
|
3 |
0.556 |
0.528 |
0.542 |
0.02 |
3.7 |
参考值 |
|
4 |
0.49 |
0.546 |
0.518 |
0.04 |
7.6 |
参考值 |
|
5 |
0.113 |
0.11 |
0.112 |
0.0021 |
1.9 |
参考值 |
◆稀释线性度测试
了解LabAssay™系列试剂盒：labchem.fujifilm-wako.com.cn/product/show/1054.html
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
| 291-93901 | LabAssay™ Creatinine LabAssay™ 肌酐检测试剂盒 |
500 tests |
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文献和实验参考文献
|
1. |
Kawamoto, T. et al. : Glycative Stress Res., 3, 15 (2016). Relationships between urinary melatonin metabolites and glycative stress and body functional age ※人尿 |
|
2. |
Guan, Y. et al. : J. Pharmacol. Sci., 135, 81 (2017). A protease-activated receptor-1 antagonist protects against podocyte injury in a mouse model of nephropathy ※小鼠尿、血浆 |
|
3. |
Ito, K. et al. : Biol. Pharm. Bull., 38, 1169 (2015). Increased Milk Protein Concentration in a Rehydration Drink Enhances Fluid Retention Caused by Water Reabsorption in Rats ※大鼠尿、血浆 |
|
4. |
Ito, K. et al. : Biol. Pharm. Bull., 38, 1169 (2015). Increased Milk Protein Concentration in a Rehydration Drink Enhances Fluid Retention Caused by Water Reabsorption in Rats ※大鼠尿、血浆 |
|
5. |
Ito, K. et al. : Biol. Pharm. Bull., 38, 1169 (2015). Increased Milk Protein Concentration in a Rehydration Drink Enhances Fluid Retention Caused by Water Reabsorption in Rats ※大鼠尿、血浆 |
|
6. |
Toyama, K. et al. : Br. J. Pharmacol., 166, 1183 (2012). Loss of multidrug and toxin extrusion 1 (MATE1) is associated with metformin-induced lactic acidosis ※小鼠血浆 |
的快速抗原测试中，当使用SafetyTector™ S时，检测限保持不变且没有假阳性结果产生(Fig. 3 A - D)。虽然快速检测试剂盒不是用 SafetyTector? S开发的，但SafetyTector™ S与原始稀释液相当。通过将SafetyTector™ S纳入基于唾液或鼻咽拭子的免疫测定的开发和优化中，可以在不影响分析性能的情况下解决使用者安全问题。 此外，SafetyTector™ S的成分能够改善许多唾液样本经常出现的质地和粘度的问题，从而改善其流动特性，这在基于流体学的免疫
方法。 收获细胞（保证健康的单细胞悬液）。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager（MDCI10000）观察到细胞融合度应为80-90%，且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中，例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注：可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管，以实现单细胞悬浮。
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