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Cell Counting K
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500T
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。 图1. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent,即电子耦合试剂) WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽,灵敏度更高。 WST-8和WST-1相比,检测灵敏度更高,更易溶解,并且更加稳定。 本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。 本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。 WST-8对细胞无明显毒性。加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵活,便于找到最佳测定时间。 本试剂盒可以测定500个样品。
注意事项: 由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待检测体系中存在较多的还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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