pBR322

Back to Basics: pBR322 and Protein Expression Systems in E. coli

plasmid-borne elements and their interaction with the particular host strain will influence the overall expression system and final productivity (3 ) (see Chapters 1 –3 ). Plasmid vector pBR322 (4 ) is a well-established multipurpose cloning

基因工程的克隆载体

1)，尿嘧啶合成酶基因(URA3)，亮氨酸合成酶基因(LEU2)，组氨酸合成酶基因(HIS4)等。 3) 生化标记基因。这类标记基因的表达产物可催化某些易检测的生化反应，常用的基因有β-半乳苷酶基因（lacZ）、葡萄糖苷酸酶基因（GUS）、氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）。 为了进一步说明载体的结构和各个结构的功能，下面举一个在基因工程中使用比较频繁的大肠杆菌载体—pBR322作为例子。 大肠杆菌载体pBR322 载体pBR322是由Bolivar 等人于1977年构建的。该载

分子克隆载体

都中止。但松弛型质粒仍继续进行复制。因此在增殖松弛型质粒时，总是要让宿主菌经氯霉素处理（在培养液中加入适量的氯霉素）抑制蛋白质的合成。图23-3　pBR322的基本结构（一）大肠杆菌质粒应用的最广泛的质粒载体是pBR322，它属松弛型质粒，有抗氨苄青霉素和抗四环素两个抗性基因可作为标记基因，有许多种常用的限制酶的切点。它全长4352个核苷酸，排列顺序已全部测定，基本结构如图23-3。当需要用pBR322来克隆BamHI酶切的一个DNA片段时，一般的做法是如图23-4所示。图23-4　pBR322克隆