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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 灵敏度:
平均 MDD 为 0.304 pg/mL
- 样本:
Cell culture supernates, tissue culture supernates, tissue lysates, serum, and plasma
- 标记物:
CCL2/JE/MCP-1
- 适应物种:
Mouse
- 应用:
VAL636
- 检测方法:
定量检测天然和重组小鼠单核细胞趋化蛋白 1 (MCP-1) / CCL2/JE 的浓度
- 检测范围:
7.81-500
- 规格:
96T
Mouse CCL2/JE/MCP-1 ELISA Kit,Valukine™
产品信息及操作手册
小鼠 CCL2/JE/MCP-1 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号:VAL636
适用于定量检测天然和重组小鼠单核细胞趋化蛋白 1 (MCP-1) /
CCL2/JE 的浓度
科研专用,不可用于临床诊断
有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效、
I. 背景
小鼠 JE 基因最初被描述为小鼠成纤维细胞中的血小板衍生生长因子诱导型基因(1)。
研究发现,小鼠 JE 编码的蛋白质属于大型 CC 趋化因子家族,该家族包含炎症和免疫
调节细胞因子。在 CC 趋化因子家族成员中,JE 在功能和结构上与 MCP/eotaxin 亚家
族的蛋白质最为接近。在 MCP/eotaxin 亚家族中,已经鉴定出五种人蛋白(MCP-1、2、
3、4 和 eotaxin)和四种小鼠蛋白(JE/MCP-1、MARC/MCP-3、MCP-5 和 eotaxin)
(1-3)。在氨基酸序列水平上,成熟的人 MCP-1 与小鼠 JE、MARC 和 MCP-5 的相
应区域分别显示出 55%、59%和 66%的同源性(1-3)。尽管 JE 一直被认为是人 MCP-1
的小鼠同源物(3-6),但最近分离出的小鼠 MCP-5 实际上更具同源性,可以被认为是
第二个人 MCP-1 的同源物(7)。
小鼠 MCP-1 的 cDNA 编码一种由 148 个氨基酸(aa)残基组成的前体蛋白,预测有一
个 23 aa 残基的信号肽,该信号肽经剪切后可生成一个由 125 aa 残基组成的成熟蛋白
(1-3)。与成熟的人 MCP-1 相比,小鼠 MCP-1 具有一个由 49 aa 残基组成的羧基末
端延伸段,该延伸段富含丝氨酸和苏氨酸残基。在 CHO 细胞中表达的重组 MCP-1(2)
以及从小鼠星形胶质细胞(4,10)和小鼠胸腺上皮细胞系(8)中纯化得到的天然 MCP-1,
均为约 30kDa 的糖蛋白,具有多个 O-寡糖链连接到 49 aa 残基的 C 末端结构域。然而,
由病毒刺激的小鼠 L929 成纤维细胞产生的天然 MCP-1 却是一种非糖基化的 7-8kDa 蛋
白,缺乏 C 末端结构域(12)。研究发现,C 末端结构域对于小鼠 MCP-1 的活性并非
必需。除成纤维细胞、星形胶质细胞和上皮细胞外,小鼠 MCP-1 还在巨噬细胞(4, 9)、
肥大细胞(7)、内皮细胞(7)、成骨细胞和成髓细胞中表达(11)。小鼠 MCP-1 在
受到包括病毒、LPS 和细胞因子如 TNF-α、IL-1、IFN-γ和 PDGF 等炎症刺激后被诱导
表达(1,3,4,12,13)。
小鼠 MCP-1 对单核细胞/巨噬细胞及淋巴细胞具有强大的趋化作用(3, 4, 13, 17)。研
究还表明,它参与 Th1/Th2 淋巴细胞分化的调节,通过增加 IL-4 的产生和抑制 IL-12
的产生来促进 Th2 的发育(18-21)。小鼠 MCP-1 的活性已被证明由小鼠 CCR2 介导,
CCR2 是一种 G 蛋白偶联的、具有七个跨膜结构域的受体(6, 14, 15)。小鼠 CCR2
的 cDNA 编码一个 373 aa 残基的蛋白质,该蛋白质在氨基酸序列水平上与人 MCP-1
受体 CCR2B 显示出最高的(80%)同源性(14-16)。小鼠 CCR2 基因已被定位到小
鼠 9 号染色体上,与小鼠 CCR1 和 CCR3 基因紧密相邻。在单核细胞/巨噬细胞中检测
到高水平的小鼠 CCR2 表达。
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠MCP-1抗体包被于微孔板上。样品,质控
品和标准品中的小鼠MCP-1会与固定在板上的抗体结合,游离的成分被洗去;加入辣根
过氧化酶标记的抗小鼠MCP-1检测抗体进行孵育。洗涤去除未结合的试剂后,加入TMB
底物溶液(显色剂)。溶液颜色与结合目标蛋白成正比;加入终止液;用酶标仪测定吸
光度。
B. 检测局限
仅供科研使用,不可用于体外诊断;
该试剂盒适用于细胞培养上清样本,组织培养上清样本、组织裂解物、小鼠血浆样
本和小鼠血清样本。
请在试剂盒有效期内使用;
不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用;
样本值若大于标准曲线的最高值,应将样本用标准品稀释液RD5-3稀释后重新检测;
检测结果的不同可由多种因素引起,包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。
22 次试验结果表明,小鼠 MCP-1 的最低检测剂量(MDD)的范围为 0.151-0.666
pg/mL 。平均 MDD 为 0.304 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相
对应浓度。
D. 校正
该免疫测定法以 R&D Systems 生产的高纯度的大肠杆菌表达的重组小鼠 MCP-1 校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的小鼠 MCP-1,然后用标准稀释液 RD5-3 稀释将样本
稀释到检测范围内,测定其线性。
此ELISA法可检测天然及重组小鼠MCP-1。
将以下表用标准品稀释液RD5-3配制成50 ng/mL的浓度来检测与小鼠MCP-1的交叉反
应。将50 ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组小鼠MCP-1对照品中,来检测对小鼠/
MCP-1的干扰。未观察到明显的交叉反应或干扰
Recombinant mouse: Other recombinant:
Eotaxin MIP-1α human MCP-1
MARC MIP-1β rat MCP-1
MCP-2 MIP-1γ
MCP-5 MIP-3α
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文献和实验实验步骤 1. Using the AbC™ Anti-Mouse Bead Kit 1) Completely resuspend the AbC™ capture beads (Component A) and negative beads (Component B) by gently vortexing for 30 seconds before use. 2) Label
RAT/MOUSE GROWTH HORMONE ELISA KIT
实验原理 This assay is a Sandwich ELISA based, sequentially, on: 1) capture of rat or mouse Growth Hormone molecules from samples to the wells of a microtiter plate coated by a pre-titered amount of anti-Growth Hormone
Capture ELISA Quantitation of Mouse Adenovirus Type 1 in Infected Organs
A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was optimized for identification of mouse adenovirus type 1 in infected brain homogenates. The ELISA method allows for a much faster quantitation of virus in infected organs than plaque
技术资料暂无技术资料 索取技术资料










