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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 样本:
Cell culture supernatant, serum
- 标记物:
IL-10
- 适应物种:
Mo
- 应用:
VAL605
- 检测方法:
定量检测天然和重组小鼠 IL-10 的浓度
- 检测范围:
15.6-1000
- 规格:
96t
Mouse IL-10 Valukine ELISA Kit
产品信息及操作手册
小鼠 IL-10 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号:VAL605
适用于定量检测天然和重组小鼠 IL-10 的浓度
有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效
背景
小鼠白细胞介素-10 (IL-10)又称为细胞因子合成抑制因子(CSIF)。它是IL-10 α-螺旋
细胞因子家族成员之一,该分子家族中还包括IL-19、IL-12、IL-22、IL-24以及IL-26/AK155
(1-3)。许多激活的造血干细胞、肝脏星状细胞、角质化细胞和胎盘细胞滋养层均分泌
IL-10。人IL-10在小鼠细胞中具有活性,但小鼠IL-10却不作用于人类细胞(4, 5)。成
熟小鼠IL-10与大鼠IL-10的氨基酸同源性为85%,与牛、犬、马、猫、人、羊、猪的氨
基酸同源性为70~77%。成熟小鼠IL-10是一个分子量为36 kDa的非共价结合的同源二聚
体,含有两个链内二硫键(4, 6, 7)。
IL-10通过由II型细胞因子受体IL-10 Rα和IL-10β组成的异聚体受体复合物发挥其生
物活性。IL-10 Rα是一个110 kDa的跨膜糖蛋白,在淋巴细胞、天然杀伤细胞、巨噬细
胞、单核细胞、星形胶质细胞、肠上皮细胞、细胞滋养层以及活化的肝星状细胞中表达
(8-13),而75 kDa的IL-10Rβ却广泛表达于生物体内(14, 15)。IL-10二聚体先结合
两个IL-10 Rα链,进一步结合两个IL-10 Rβ链(14, 15)。IL-10 Rβ不直接与IL-10结合,
但参与信号转导。IL-10 Rβ分别与IL-20 Rα、IL-22 Rα1和IL-28 Rα形成IL-22、IL-26、
IL-28和IL-29的受体复合物(16-18)。
IL-10参与抑制和激活作用的免疫调节。IL-10作为抗炎症的细胞因子是通过抑制
Th1 细胞和Th17细胞的激活和扩张(19-21),同时促进M2巨噬细胞的形成(21)。
免疫抑制调节T细胞和B细胞的表达对Treg细胞增殖有重要作用(19)。在肿瘤微环境中,
IL-10抑制调节T细胞和髓系来源抑制细胞的增殖(22, 23)。IL-10诱导瘤内物质的累积
并激活CD8+ T细胞(24, 25)。IL-10在限制关节炎症中的组织损伤,促进损伤后肌肉
再生长过程中发挥重要保护作用,但也促成持久性病毒感染(19, 21, 26)。在修格兰
氏症候群(唾液)和原发性中枢神经系统淋巴瘤中IL-10的含量有所升高(30-32)。
II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠IL-10抗体包被于微孔板上,样品和标准品中的
IL-10会与固定在板上的抗体结合,游离的成分被洗去;加入辣根过氧化酶标记的抗小
鼠IL-10抗体,游离的成分被洗去;加入TMB底物溶液(显色剂)。溶液颜色与结合目
标蛋白成正比;加入终止液;用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
仅供科研使用,不可用于体外诊断;
该试剂盒适用于细胞培养上清样本和小鼠血清样本;
请在试剂盒有效期内使用;
不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用;
样本值若大于标准曲线的最高值,应将样本用标准品稀释液(1×)稀释后重新检测;
检测结果的不同可由多种因素引起,包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。
III. 优势
A. 精确度
板内精确度(同一板内不同孔间的精确度)
已知浓度的两个样本,在同一板内分别检测20次,以确定板内精确度。
板间精确度(不同板之间的精确度)
已知浓度的三个样本,在不同板中分别检测20次,以确定板间精确度。
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠IL-10,测定其回收率。回收率范
围在95-103%, 平均回收率在99%。
在小鼠血清样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠IL-10,测定其回收率。回收率范围
在75.8-84.0%,平均回收率在80.3%。
C. 灵敏度
小鼠IL-10的最低可测剂量(MDD)一般小于1.97pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组小鼠IL-10蛋白所校
正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的小鼠 IL-10,然后用标准品稀释液(1×)将样本稀释
到检测范围内,测定其线性。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的小鼠 IL-10,然后用标准品稀释液(1×)将样本稀释
到检测范围内,测定其线性。
稀释倍数 平均值/期待值(%) 范围 (%)
1:2 93 90 - 94
1:4 90 85 - 94
1:8 89 84 - 96
1:16 87 84 - 92
F. 样本预值
细胞培养上清液 - 以下的小鼠脾脏组织匀浆,其原代细胞培养于含有10%胎牛血清的
100 mL的RPMI1640培养基中,同时还含有2 mM L-谷氨酰氨、100 U/mL青霉素、100
μg/mL链霉素。细胞分别未经和经有1 μg/mL LPS刺激3天。取细胞培养上清测定小鼠
IL-10含量,结果见下表。
原代细胞种类 未刺激 (pg/mL) 刺激组 (pg/mL)
脾 - 77.1
小鼠脾脏组织经PBS冲洗后置于冰上。组织匀浆后,其原代细胞培植于含有10%胎牛血
清、50 μM β-硫基乙醇、2 mM L-谷氨酰胺、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的RPMI
1640培养基中。细胞经由100 ng/mL的重组小鼠IFN-γ和1 μg/mL LPS刺激4天。取细胞
培养上清测定小鼠IL-10含量,结果为515 pg/mL。
小鼠血清样本 - 使用本试剂盒检测了4份小鼠血清样本中小鼠IL-10的水平。所有样本的
检测值均低于最低标准品,15.6 pg/mL。
G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组小鼠IL-10蛋白。将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检
测与小鼠IL-10的交叉反应。将50 ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组小鼠IL-10对照
品中,检测对小鼠IL-10的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。
22
Recombinant mouse Other Recombinants
IFN-α/β R2 IL-19 canine IL-10
IFN-γ R1 IL-20 equine IL-10
IFN-γ R2 IL-22 feline IL-10
IL-10 R IL-22 R human IL-10
IL-10 Rα IL-24 porcine IL-10
IL-10 Rβ viral IL-10
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文献和实验RAT/MOUSE GROWTH HORMONE ELISA KIT
实验原理 This assay is a Sandwich ELISA based, sequentially, on: 1) capture of rat or mouse Growth Hormone molecules from samples to the wells of a microtiter plate coated by a pre-titered amount of anti-Growth Hormone
Reproducible purification of DNA and RNA in 96-well format. Genomic DNA and total RNA were purified from mouse tissues using the AllPrep DNA/RNA 96 Kit. A Purified DNA samples were analyzed on a 0.8% agarose gel. B
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