Mouse IL-33 ELISA Kit，Valukine

Mouse IL-33 ELISA Kit，Valukine™

小鼠 IL-33 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL614
适用于定量检测天然和重组小鼠 IL-33 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

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I. 背景
IL-33，也被称为NF-HEV和DVS 27，是一种具有细胞内外活性的30 kDa促炎性蛋白
(1, 2)。IL-33在平滑肌和气道上皮组织中为组成性表达。而通过一些细胞，如角质形成细
胞和真皮成纤维细胞中的炎症刺激，如心脏成纤维细胞中的机械应变，IL-33可上调其表
达 (3-5)。小鼠IL-33由266个氨基酸(aa)分子合成，其中包含一个N-端核定位信号，一个
螺旋-转角-螺旋基序，以及一个与IL-1家族细胞因子具有结构同源性的C-端区域。全长
IL-33与核染色质相互作用，作为转录抑制因子发挥作用 (3, 4, 6)。Caspase-1样蛋白酶可
对全长IL-33进行切割，导致一个18 kDa 的C-末端片段被分泌，即成熟IL-33 (7-9)。成熟
小鼠IL-33与人类和大鼠IL-33的aa序列同源性分别为57%和90%。它与其它IL-1家族蛋白
的aa序列同源性不到25%。
成熟的IL-33与跨膜受体ST2L/IL-1 R4结合，后者随后与IL-1 R3（也称为IL-1 RAcP）
结合，使IL-33依赖性激活NFκB (7, 10-13)。IL-1 R3是一个共享信号亚基，也与IL-1 R1
和IL-1 R6相关。ST2L的交替剪接产生ST2，一种可溶性诱饵受体，在哮喘和心力衰竭患
者的血清中升高 (5, 14)。ST2与IL-33的结合阻断了ST2L依赖性信号传导，IL-33的免疫
和心脏效应 (5, 14)。
分泌的IL-33促进Th2偏向性免疫反应，导致嗜酸性粒细胞增多和过敏性炎症 (15)。
在Th2细胞中，它可以上调IL-4、IL-5、IL-13和ST2L (7, 12)。在肥大细胞中，它能促进几
种细胞因子和趋化因子的产生，但不会引发脱颗粒 (16-19)。它可以抑制肥大细胞的凋亡，
并作为Th2细胞的趋化剂作用于炎症部位 (17, 20)。IL-33/ST2L系统在心脏中起保护作用。
IL-33与ST2L的相互作用抵消了血管紧张素II或苯肾shang腺 ，素诱导的心肌细胞肥大 (5)。在诱
导心肌成纤维细胞产生IL-33的同时，机械应力诱导心肌细胞产生ST2 (5)。

I. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗小鼠IL-33抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的小鼠IL-33会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗
小鼠IL-33检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过
氧化物酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显
色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和小鼠血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

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III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。

B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠IL-33，测定其回收率。回收率范围
在83.7-107.1%，平均回收率在98.7%。
在小鼠血清样本中掺入检测范围内不同水平的小鼠IL-33，测定其回收率。回收率范围在
81.4-98.6%，平均回收率在89.3%。
C. 灵敏度
小鼠IL-33的最低可测剂量（MDD）一般小于3.6 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组小鼠成熟IL-33 (aa
109-266) 蛋白所校正。

F. 样本预值
小鼠血清样本 - 使用本试剂盒检测了5份小鼠血清样本中小鼠IL-33的水平。所有样本的
检测值均低于小鼠IL-33最低标准品，15.6 pg/mL。
G. 特异性
将以下因子配制成50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant mouse
Pro-IL-33 (aa 1-108)
ST2/IL-1 R4/Fc Chimera
样本中含有6.25 ng/mL重组人IL-33时，检测值为105 pg/mL（1.7%交叉反应）。