Human IGF-2 Valukine ELISA Kit

Human IGF-2 Valukine ELISA Kit

目录号：VAL160
适用于定量检测天然和重组人 IGF-2 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
胰岛素生长因子-2 (IGF2)，也称为生长激素-A，是一种8 kDa糖基化的胰岛素家族
肽激素。它是生长和代谢调节蛋白系统的一部分，在神经系统、肾上腺皮质和骨骼系统的
发育过程中尤为重要 (1,2)。人IGF2作为前体蛋白合成，包含24个氨基酸 (aa) 信号序列、
67个aa的成熟区，和89个aa的C-末端前段，通常称为E结构域(3,4)。连续的蛋白水解过
程产生18 kDa的前体IGF2，然后是成熟的IGF2，它由一个N端B结构域、一个C结构域、
一个A结构域和一个D结构域组成 (5,6)。B-C-A序列是前胰岛素的再融合序列，它被进一
步处理去除C结构域。成熟的人IGF2与小鼠和大鼠IGF2的氨基酸同源性分别为91%和9
4%。其他与IGF2相关的产物包括一个56 aa的N末端延伸的剪接异构体，“大”IGF2保留2
1 aa的E结构域，以及Preptin (E结构域的34 aa片段)，其由胰腺β细胞分泌，并促进胰
岛素分泌和成骨细胞增殖 (7-9)。
IGF2主要由肝脏合成，在胎儿和成人体内循环 (1,2)。在血液中，成熟的IGF2与IGF
BP-1、2、4或6结合，并可与IGFBP-3或IGFBP-5加ALS（酸性不稳定亚单位）形成三元
复合物。它还可以与可溶性IGF2 R结合 (可能携带20%的总循环IGF2) (10,11)。ProIGF
2也可以循环并与IGFBP-5和ALS形成三元复合物 (6,11)。一旦与其载体蛋白分离，成熟
的IGF2在多种细胞类型具有促有丝分裂、抗凋亡和胰岛素样活性。它结合并激活IGF-1R、
IGF2R、胰岛素R (A和B异构体) 和IGF-1R：胰岛素R-A混合受体 (6,10,12-15)。

A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IGF-2捕获抗体包被于微孔板上，样品和标准
品中的人IGF-2会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗
人IGF-2检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过氧
化物酶 (Streptavidin-HRP) 孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色
剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

B. 回收率
在细胞培养基中掺入检测范围内不同水平的人 IGF-2，测定其回收率。回收率范围在
92.0-104.7%，平均回收率在 97.4%。
C. 灵敏度
人 IGF-2 的最低可测剂量（MDD）一般小于 1.24 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems 生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人 IGF-2 蛋白所
校正。

G. 特异性
将以下因子配制成 50 ng/mL 的浓度检测，没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant human
IGFBP-rp1 IGF2R
IGF-1 Insulin R
IGF1R Proinsulin
含有 3.1 ng/mL 重组小鼠 IGF-2 的样本检测值为 42.3 pg/mL（1.4%交叉反应性）。
以下因子不会发生交叉反应，但在下列浓度下会产生干扰：
Recombinant Factor Concentration
human IGFBP-1 > 2500 pg/mL
human IGFBP-2 > 12.5 pg/mL
human IGFBP-3 > 0.8 pg/mL
human IGFBP-4 > 125 pg/mL
human IGFBP-5 > 1563 pg/mL
human IGFBP-6 > 0.8 pg/mL