Human IL-1 beta Valukine ELISA

Human IL-1 beta Valukine ELISA Kit

人 IL-1β/IL-1F2 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL101
适用于定量检测天然和重组人白介素 1β（IL-1β）/白介素 1F2（IL-1F2）的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
白细胞介素1 (IL-1)家族蛋白包括经典成员IL-1α、IL-1β和IL-1ra，IL-18、IL-33和
IL-1F5-F10。IL-1α和IL-1β有相同的细胞表面结合受体，形式相同的生物学功能（1）。
健康人未刺激的细胞是不产生IL-1的，只有皮肤角质形成细胞、一些上皮细胞，以及中枢
神经系统的某些细胞是例外。但在响应炎症因子、感染、或微生物内毒素时，IL-1在巨噬
细胞和其他类型细胞表达急剧增加。IL-1β在免疫和炎症应答、骨重塑、发热、碳水化合
物代谢、GH/IGF-1的生理过程中起重要作用。多种疾病与 IL-1表达失调或延时表达相关，
其中包括败血症、类风湿关节炎、炎性肠道疾病、急性和慢性髓细胞白血病、胰岛素依赖
型糖尿病、动脉粥状硬化、神经损伤和老年退化有关的疾病（2-5）。
IL-1α和IL-1β是结构相关的多肽，在氨基酸水平约有25%的同源性。两者都是先合成
为 31kDa前体，然后裂解为大约17.5 kDa的成熟蛋白（6, 7）。由Caspase-1/ICE对IL-1β
的前体切割是炎症反应的关键步骤（2, 8）。尽管IL-1α和IL-1β都不含有一个典型的疏水
信号肽（9-11），但有证据表明，它们可以经非经典途径分泌到胞外（12, 13）。未处理
的IL-1α部分可在细胞膜上展示，并可能保留生物活性（14）。与IL-1α前体不同，IL-1β
前体与成熟的IL-1β相比，具有很少或根本不具有生物活性（13, 15）。IL-1β前体与成熟
的IL-1β都运至胞外。
IL-1α和IL-1β通过免疫球蛋白超家族受体与IL-1ra结合发挥其效应。80 kDa的I型跨膜
受体（IL-1RI）在多种细胞中表达，包括T细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、内皮细胞、
滑膜衬里细胞、软骨细胞和肝细胞（16, 17）。68 kDa的II型跨膜受体（IL-1 RII）在B细
胞、中性粒细胞和骨髓细胞中表达（18）。IL-1RI和IL-1RII的胞外区域享有28%的同源性。
但其他区域有显著不同：II型受体的胞内域只有29个氨基酸，而I型受体的胞内域有213个
氨基酸。IL-1RII似乎对IL-1信号没有响应，其功能是作为诱骗受体从而削弱IL-1的作用（19）。
IL-1受体配体蛋白（IL-1 RAcP）与IL-1RI相互作用是IL-1RI信号传导所必需的（20）。IL-1ra
是分泌型分子，是IL-1的竞争性抑制剂（21, 22）。可溶性IL-1RI和IL-1RII存在于人的血
浆、关节液、及几种细胞株的条件培养基中（23, 24）。此外，牛痘病毒编码类似于可溶
性IL-1RII的IL-1结合蛋白（25）。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-1β抗体包被于微孔板上，样品和标准品中
的人IL-1β会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化酶标记的抗
人IL-1β检测抗体进行孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清、人血清和人血浆样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。

B. 回收率
在不同类型样本中掺入检测范围内不同水平的人IL-1β，测定其回收率。

C. 灵敏度
人IL-1β的最低可测剂量（MDD）一般小于1.0 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人IL-1β蛋白所校
正。

E. 线性
在不同类型样本中含有或者掺入高浓度的人IL-1β，然后用稀释液（1×）将样本稀释到检
测范围内，测定其线性。

G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人IL-1β蛋白。将以下因子用稀释液（1×）配制成50 ng/mL
的浓度来检测与人IL-1β的交叉反应。将50 ng/mL干扰因子掺入中间浓度重组人IL-1β控制
品中，来检测对人IL-1β的干扰。没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant human Recombinant mouse
EGF IL-2 IL-9 IL-1α IL-13
G-CSF IL-2 sRα IL-10 IL-1β TNF-α
GM-CSF IL-3 IL-11 IL-3
sgp130 IL-3 sRα IL-12 IL-4
GROα IL-4 IL-13 IL-5
GROβ IL-4 sR IL-18 IL-5 sRα
IFN-γ IL-5 PDGF-AA IL-6
IGF-I IL-5 sRβ PDGF-AB IL-7
IGF-II IL-6 PDGF-BB IL-9
IL-1a IL-6sR VEGF IL-10
IL-1ra IL-7
重组人IL-1 sRI和IL-1 sRII在这个测试中没有交叉反应。但当蛋白浓度大于10000 pg/mL
时，可以观察到干扰。