Human Lymphotoxin-α/TNF-β ELIS

Human Lymphotoxin-α/TNF-β ELISA kit

人 Lymphotoxin-α/TNF-β ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL185
适用于定量检测天然和重组人 Lymphotoxin-α/TNF-β的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
淋巴毒素-α (LT-α)，又称肿瘤坏死因子-β (TNF-β)，是TNF超家族的成员 (1)。人
LT-α/TNF-β是一个22 kDa的蛋白质，与小鼠LT-α/TNF-β有75%的氨基酸序列相同 (2-3)。
TNF-β和TNF-α是两种结构和功能相关的蛋白质，它们与相同的细胞表面受体 (TNF RI
和TNF RII)结合，并产生大量相似但不完全相同的效应 (4-6)。成熟LT-α/TNF-β和TNF-α
具有大约35%的蛋白序列同源性，且两种蛋白的生物活性分泌形式均为同源三聚体。虽然
TNF-α可以作为II型膜蛋白存在，但LT-α/TNF-β具有典型的信号肽序列，是一种分泌型蛋
白。有研究表明，LT-α/TNF-β也存在于活化的T、B和LAK细胞的表面，与LT-β (一种II型
膜蛋白，是TNF配体家族的另一成员)形成异源三聚体 (7)。这种异源三聚体结合并激活巨
噬细胞、树突状细胞、肝细胞、肠上皮细胞 (IEC)、滤泡树突状细胞 (FDC)和高内皮微静
脉(HEV)上的LT-β 受体(8-10)。促进淋巴组织中FDC网络和HEV的发展，促进未成熟B细
胞的类别转换产生IgA，促进IEC产生IL-22 (11-14)。
LT-α/TNF-β 除了对肿瘤细胞的细胞毒性作用外，还介导淋巴结发育、炎症和免疫功
能 (15-18)。越来越多的证据表明，LT-α/TNF-β在活化的T和B淋巴细胞中表达，并促发
自身免疫性疾病(19, 20)。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人TNF-β抗体包被于微孔板上，样品和标准品中
的人TNF-β会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的抗人
TNF-β检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣根过氧化
物酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。
溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验员的操作、移液器的使用方式、洗板技
术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人TNF-β，测定其回收率。回收率范围在
90.8-111.7%，平均回收率在103.8%。
在血清样本中掺入检测范围内不同水平的人TNF-β，测定其回收率。回收率范围在
88.9-104.4%，平均回收率在100.0%。
C. 灵敏度
人TNF-β的最低可测剂量（MDD）一般小于0.80 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人TNF-β蛋白所校
正。

G. 特异性
将以下因子配制成 50 ng/mL的浓度来检测没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant human： Recombinant mouse：
GM-CSF TNF-α
IL-8
IL-1β
TNF-α
重组人淋巴因子α1/β2 蛋白样本值 12.5 ng/mL 的检测值为 78.2 pg/mL(0.63%交叉反应)。
重组人 TNF RI 无交叉反应，但在浓度大于 1.56 ng/mL 时有干扰作用 。
重组人 TNF RII 无交叉反应，但在浓度大于 3.13 ng/mL 时有干扰作用。