Human IL-12 p70 Valukine ELISA

Human IL-12 p70 Valukine ELISA Kit 

人 IL-12 p70 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL115
适用于定量检测天然和重组人白介素 12 p70（IL-12 p70）的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
白细胞介素 12 p70 (IL-12)，又称自然杀伤细胞刺激因子(NKSF) 或细胞毒性淋巴
细胞成熟因子(CLMF)，是一种由 40 kDa (p40)亚基和 35 kDa (p35) 亚基组成的异二聚
多效细胞因子(1, 2-4)。人 p40 可作为单体、均二聚体或与 p35 结合形成 IL-12 或与 p19
结合形成 IL-23 的复合物循环(2-4, 5)。同源二聚体 p40 和 IL-23 均可与 IL-12R 结合，
作为非信号拮抗剂 (2, 6, 7)。或者 p40 为也可以绑定到 Rβ1,激活小胶质细胞和巨噬细
胞 (3, 8)。IL-12 p40 亚基与另一种异二聚细胞因子 IL-23 共享，与 IL-12 相似且不同的
生物活性。已知产生 IL-12 的细胞包括巨噬细胞和树突状细胞 (9)、单核细胞 (10)、朗
格汉斯细胞 (11)、中性粒细胞 (12)、角质形成细胞 (13)、浆细胞样树突状细胞 (14)、
小胶质细胞 (4)、CD8+ DC(仅小鼠细胞) (15)和非生发中心(CD38-CD44+) B 细胞 (仅人
类细胞) (2, 16)。功能性 IL-12 显示增强细胞毒活性和诱导 NK 细胞、T 细胞和树突状表
皮 T 细胞(2, 17-19)内干扰素γ (IFN-γ) 的产生。IL12 也被报道可由巨噬细胞诱导 IFN-γ
生产 (29)。IL-12 与 IL-12 家族其它成员 IL-23 和 IL-27 共同促进 CD4+ Th1 免疫反应的
发展 (3, 4, 20)。作为对感染的反应，IL-27 首先被释放，促进 Th0 到 Th0/1 的转变。
随后产生 IL-12，产生 Th1 效应细胞。IL-12 与 IL-18 联合，从效应细胞中产生 Th1 记
忆细胞，这些细胞随后被 IL-23 激活 (3)。虽然小鼠 IL-12 对人和小鼠细胞都有活性，
但人 IL-12 对小鼠细胞没有活性。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。抗人 IL-12 p70 单抗包被于微孔板上，经过孵育，
样品和标准品中的 IL-12 p70 会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加
入生物素化的抗人 IL-12 p70 多抗进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧
化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-HRP)孵育。洗涤后，加入 TMB 底物溶液，避光
显色。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；随后加入终止液，用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清和血清样本。
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释剂（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测 20 次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测 20 次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值（pg/mL） 49.9 256 1333.2 53.4 282.9 1484.9
标准差 2.9 11.6 79.2 4.4 23.4 135.5
CV% 5.7 4.5 5.9 8.2 8.3 9.1
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-12 p70，测定其回收率。回收率
范围在 116-119%，平均回收率在 117.6%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人 IL-12 p70，测定其回收率。回收率范围
在 97.9-105.9%，平均回收率在 101.3%。
C. 灵敏度
人 IL-12 p70 的最低可测剂量（MDD）一般小于 0.7 pg/mL。
MDD 是根据 20 个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相
对应浓度。

D. 校正
此 ELISA 试剂盒经由 R&D Systems®生产的 Sf 21 表达的高纯度重组人 IL-12 p70 蛋白
所校正。
E. 线性
不同的样本中掺入高浓度的人 IL-12 p70，然后用标准品稀释剂（1×）将样本稀释到检
测范围内，测定其线性。

F. 样本值
血清 - 使用本试剂盒检测了 40 份来自健康志愿者的样本中 IL-12p70 的水平。这些样
本供应者供者没有病史。所有样本均低于人 IL-12 p70 最低标准 31.3 pg/mL。
G. 特异性
此 ELISA 法可检测天然及重组人 IL-12 p70 蛋白。对制备的 50ng/mL 的下列因素进行
了测定，无交叉反应或干扰。
重组人: 重组小鼠:
IL-12 p35 IL-12 p70
IL-12/IL-23 p40
IL-23