Human Siglec-5/14 ELISA Kit

Human Siglec-5/14 ELISA Kit

产品信息及操作手册
人 Siglec-5/14 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL191
适用于定量检测天然和重组人 Siglec-5/14 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
Siglecs（1）（唾液酸结合Ig样凝集素）是属于Ig超家族的I型（Ig型）凝集素（2）。
它们的特征为N-末端有介导唾液酸结合的Ig样V型结构域（3），随后是不同数量的Ig样
C2型结构域（1，4）。已经克隆并鉴定了11个人类Siglecs（1，4）。它们是唾液粘附素
/CD169/Siglec-1、CD22/Siglec-2、CD33/Siglec-3、髓鞘相关糖蛋白（MAG/Siglec-4a）
和Siglec-5至Siglec-11（4，5，6）。迄今为止，还没有发现Siglec识别唾液酸以外的任
何细胞表面配体，这表明与含有这种碳水化合物的聚糖的相互作用在介导Siglec的生物功
能方面非常重要。Siglec-5至Siglec-11在其细胞外和细胞内区域与CD33/Siglec-3具有高
度序列相似性。它们统称为CD33相关Siglecs。CD33相关Siglecs的一个显著特征是它们
在造血系统中的差异表达模式（4，5）。这一事实再加上其细胞质尾部存在两个保守的
免疫受体酪氨酸抑制基序（ITIM），表明CD33相关的Siglecs参与免疫系统内细胞激活的
调节。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人Siglec-5/14抗体包被于微孔板上，样品和标准
品中的人Siglec-5/14会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化
的抗人Siglec-5/14检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的
辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶
液（显色剂）。溶液颜色与结合的人Siglec-5/14成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光
度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清和人血清；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

B. 灵敏度
人Siglec-5/14的最低可测剂量（MDD）一般小于1.25 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
C. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems NS0表达的高纯度重组人Siglec-5/Fc Chimera蛋白所
校正。
D. 线性
在不同类型样本中含有或掺入高浓度的人Siglec-5/Fc Chimera蛋白，然后用标准品稀释液
（1×）将样本稀释到检测范围内，测定其线性。

. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人Siglec-5/14蛋白。
将以下因子用标准品稀释液（1×）配制成50 ng/mL的浓度来检测与人Siglec-5/14的交叉
反应。将50 ng/mL的干扰因子掺入中间范围的重组人Siglec-5/14对照品中，来检测对人
Siglec-5/14的干扰。下表因子没有观察到明显的交叉反应或干扰。
Recombinant human:
Siglec-3/Fc Chimera
Siglec-7/Fc Chimera
Siglec-9/Fc Chimera
该试剂盒中的抗体对也能识别人类Siglec 5和人类Siglec 14相似的氨基酸序列。