- ￥3300
- Novus
- 313-20000
- VAL113
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 样本：
Cell culture supernatant, serum
- 标记物：
MMP-9
- 应用：
VAL113
- 检测方法：
ELISA Kit
- 检测范围：
313-20000
- 规格：
96T
Human MMP-9 Valukine ELISA Kit
人 MMP-9 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL113
适用于定量检测天然和重组人基质金属蛋白酶（MMP-9）的含量
科研专用，不可用于临床诊断
有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效
I. 背景
基质金属蛋白酶（MMPs）也被称为matrixins，是锌钙依赖性蛋白水解酶家族成员，
可分解细胞外基质（ECM），在不同的亚细胞环境中，参与多种分子的加工过程。MMPs
在众多生理学进程中发挥重要功能，例如胚胎发育、形态发生、繁殖以及组织重构（1,
2）。也参与炎症以及自身免疫疾病，例如关节炎、癌症和心血管疾病（3-5）。新合成
的MMPs的量主要在转录水平被调节，已经存在的MMPs的蛋白水解活性，不仅受控于
酶原的活性，也受控于内源性抑制剂对酶活性的抑制，例如α2-巨球蛋白，以及金属蛋
白酶组织抑制剂（TIMPs）（6）。
MMP-9（也称明胶酶B、92 kDa IV型胶原酶、92 kDa明胶酶、V型胶原酶）作为糖
基化酶原被分泌出来（6-8）。酶原的活化涉及到N-末端前体区域的蛋白水解去除，最
终形成82 kDa的活性酶（9, 10）。活性人MMP-9与小鼠和大鼠的MMP-9分别有72%和
74%的氨基酸序列同源性。除了锌结合位点，催化结构域还包含三个连续的纤连蛋白II
型同源单位，可结合明胶（11）。富含脯氨酸的铰链区将催化结构域连接到C-末端血红
素样结构域。在体外实验中，酶原经4-氨基基乙酸乙酯（APMA）处理后，不仅能产
生活性酶，还能产生活性与其相当的 C-末端截短形式（12）。MMP-9可降解ECM中的
成分，尤其对变性胶原（明胶）有非常高的特异性。MMP-9也可裂解III、IV、V、XI型
胶原，以及弹性蛋白、巢蛋白-1和玻连蛋白（2, 3）。MMP-9还可裂解多种趋化因子和
生长因子（例如IL-1β、CXCL8/IL-8、CXCL7、CXCL4、CXCL1、Latent TGF-β、膜结
合TNF-α、VEGF和FGF basic），β-淀粉样蛋白、P物质、髓鞘碱性蛋白（3, 13-15）。
此动作可提高或降低这些可溶性因子的生物活性，也可使它们从与ECM的联合中被释放
出来（16, 17）。MMP-9也可通过各种各样的膜蛋白触发信号通路，或是诱导它们从细
胞膜上脱落从而抑制信号通路（例如CD44，E-钙黏蛋白、整合素、ICAM-1和IL-2 Rα）
（3, 18-20）。
MMP-9由多种正常细胞和转化细胞产生，包括中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、
星形胶质细胞、纤维原细胞、破骨细胞、软骨细胞、角化细胞、内皮细胞和上皮细胞。
它影响生理性和病理性的血管生成和血管重构（21-25）。活化的中性粒细胞释放
MMP-9前体，不结合TIMP-1，允许促血管生成的FGF-2从ECM中释放出来（17）。MMP-9
和TIMP-1的复合物不能诱导FGF-2的释放（17）。中性粒细胞来源的MMP-9可加剧炎
症反应，通过产生来自胶原多肽来诱导额外的中性粒细胞MMP-9的释放（26）。MMP-9
在骨形成和重构（1, 21, 27）、甲基苯诱导行为敏化与应答（28）、神经元突触重
构的调控（29）、着床过程中的滋养层入侵（30）、丝氨酸蛋白酶抑制剂α1的活化（31）
中也发挥重要作用。MMP-9介导的粘附分子的脱落对于肿瘤细胞的侵袭也有直接作用
（18-20）。
MMP-9的循环水平在许多炎症失调疾病中有所升高，包括管腔内血栓的形成（32）、
动脉粥样硬化（33）、克罗恩氏病（34）、丙型肝炎病毒感染（35）、结肠直肠癌（36）
以及杜氏肌营养不良（37）。MMP-9与TIMP-1的比例在多发性硬化症的血清（38）和
囊性纤维化患者的痰（39）中升高，但在巨细胞病毒感染的血清中降低（40）。游离
MMP-9的水平、MMP-9与脂质运载蛋白-2/NGAL复合物的水平分别在卵巢癌患者、子
宫尿道感染患者的尿液中升高（41, 42）。
II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人MMP-9单抗包被于微孔板上，样品和标准品
中的MMP-9会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入辣根过氧化酶标记的
抗人MMP-9多抗，未结合的抗体被洗去；加入TMB底物溶液，溶液颜色与结合的目标
蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
仅供科研使用，不可用于体外诊断；
该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
请在试剂盒有效期内使用；
不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释剂（1×）稀释后重新检测；
检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板间分别检测40次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
数量 20 20 20 40 40 40
平均值 (ng/mL) 0.833 2.04 11 0.972 2.35 12.2
标准差 0.017 0.039 0.316 0.077 0.184 0.845
CV% 2 1.9 2.9 7.9 7.8 6.9
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人MMP-9，测定其回收率。回收率范围
在85-104%，平均回收率在97%。
C. 灵敏度
人MMP-9的最低可测剂量（MDD）一般小于0.156ng/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems®生产的大肠杆菌表达的高纯度重组人MMP-9蛋白所
校正。
E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人MMP-9，然后用稀释剂（1×）将样本稀释到检测
范围内，测定其线性
细胞上清样本-人的外周血单核细胞（5×106 细胞/mL）培养于含有5%胎牛血清的
RPMI1640培养基中，细胞培养基还含有2mM L-谷氨酰胺、50μM β-巯基乙醇、100U/mL
青霉素, 100μg/mL链霉素，部分另加10μg/mL PHA刺激细胞，在1和5天，取少量未经
刺激和刺激后的细胞上清液测定MMP-9含量，结果见下表。
条件 第 1 天 (ng/mL) 第 3 天 (ng/mL)
未刺激 132 33.8
刺激 522 210
血清样本-使用本试剂盒检测了4份人血清样本中MMP-9的水平。4份样本的检测值在
557.9-610.8 ng/mL之间，平均值为581.6ng/mL。
G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组人分子量为92kDa MMP-9蛋白原肽及82kDa激活形式的
MMP-9蛋白，不能测定分子量为65kDa的MMP-9蛋白。将以下因子用稀释剂（1×）配
置成100ng/mL或200ng/mL的浓度来检测与人MMP-9的交叉反应。将200ng/mL的干扰
因子掺入中间范围的重组人MMP-9对照品中，来检测对人MMP-9的干扰。没有观察到
明显的交叉反应或干扰。
重组人蛋白
ADAM8 MMP-8
ADAM10 MMP-10
ADAM15 MMP-12
Lipocalin-2/NGAL MMP-13
MMP-1 TACE (ADAM17)
MMP-2 TIMP-2
MMP-3 TIMP-3
MMP-7 TIMP-4
使用重组人TIMP蛋白干扰检测，浓度≥ 6.25 ng/mL时，观察到有交叉反应。
重组小鼠蛋白
ADAM9 MMP-2
ADAM10 MMP-3
ADAM15 MMP-9
Lipocalin-2/NGAL TIMP-1
使用重组大鼠TIMP-1蛋白干扰检测，当浓度≥ 200 ng/mL时，也观察到有交叉反应。
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文献和实验有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂，增加了操作步骤，在临床检验中ABS-ELISA应用不多。科研项目中检测微量的成分如细胞因子常采用本法。晶美分装ELISA KIT采用的方法：1， TORCH及传染病试剂盒（间接法），见2.2.32， TORCH-IgM捕获法特色：包被抗体，标记抗原原理：3， 细胞因子试剂盒采用的方法路线（ABC-ELISA）原理产品特色：采用ABC法，灵敏度更高，特异性更强。生物素抗体和酶联物是浓缩的，使用前需用相应的缓冲液稀释。酶联物可以通用
的原理用于分子诊断方面：TrimGen公司的KRAS Mutation Detection Kit在96孔板里一次能实现7/8个KRAS突变位点的检测。 另外基于相同原理的技术还有PPT-ELISA。这是用来筛截短突变的，相关文章见：1，Rapid screen for truncating ATM mutations by PTT-ELISA . 2，An ELISA-based high throughput protein truncation test
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浆中HMW 脂联素的水平，而不需要对样品进行蛋白水解的预处理。关于脂联素相关产品的更多信息，请访问我们的网站www.RnDSystems.com/Adipocytokines。人HMW 脂联素水平的测定。利用Quantikine Human HMW Adiponectin/Acrp30ELISA Kit（货号 DHWAD0），我们分析了来自不同BMI 个体的血清中的HMW 脂联素平均水平，包括低BMI（平均BMI = 19.8 ；N=4），高BMI（平均BMI = 32.8 ；N=4）和超高BMI（平均
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