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- 详细信息
- 技术资料
- 样本:
Cell culture supernatant, serum
- 标记物:
FGF-19
- 应用:
VAL148
- 检测方法:
ELISA
- 检测范围:
15.6-1000
- 规格:
96T
Human FGF-19 Valukine ELISA Kit
适用于定量检测天然和重组人 FGF-19 的浓度
科研专用,不可用于临床诊断
I. 背景
成纤维细胞生长因子(FGF)家族至少包含22种高度保守的蛋白质,在线虫、果蝇
和人类等许多物种中均有发现(1)。FGF是一种肝素结合生长因子,其核心120个氨基酸(aa)
构成的FGF结构域,具有普通的三级结构。通常,FGFs在胚胎发育过程和受限性成人组
织中表达。它们作用于中胚层和神经外胚层来源的细胞,以调节多种生理功能,包括血管
生成,细胞生长,图式形成,代谢调节,细胞迁移,神经营养作用和组织修复(2)。FGF
家族的活性由四种受体介导,即FGF R1至FGF R4(2)。这些受体是具有酪氨酸激酶结构
域的跨膜蛋白,被认为是典型的酪氨酸激酶受体。FGF R5 / FGF RL1也有报道,但缺乏
激酶结构域和信号传导能力(3)。
人FGF-19 cDNA序列预测了一个251 aa的前体蛋白,带有一个22 aa的信号肽和一个
229 aa的分泌型成熟蛋白,且没有潜在的N-连接糖基化位点(4,5)。它与小鼠和大鼠
FGF-15的氨基酸序列同源性约为50%,与鸡FGF-19的氨基酸序列同源性为62%(4-6)。与
大多数结合并激活多个FGF受体的FGF不同,FGF-19似乎仅结合FGF R4(5)。受体结合
能够激活MAP激酶并诱导催乳素启动子(7)。FGF-19有两个推测的二硫键,其中一个在
FGF家族中是保守的(8)。特别的是,它还有一个扩展的环状结构二硫键,可能会影响硫
酸乙酰肝素的结合(8)。
FGF-19的功能作用仍有待阐明,包括发育、代谢和致瘤活性方面。在鸡胚胎发生过
程中,FGF-19已被证明会与Wnt-8c协同作用,启动内耳发育(6)。然而,小鼠的此活性不
需要FGF-19的同系物FGF-15(9)。FGF-19也在鸡胚胎眼中表达,可能在晶状体发育中发
挥作用(10)。关于人FGF-19功能的问题已经通过异位表达来验证。小鼠中人FGF-19的转
基因过表达导致肿瘤形成,能量消耗增加,肥胖减少,以及对高脂肪饮食致使体重增加有
所抵抗(11,12)。在静脉注射重组FGF-19的小鼠中也观察到类似的影响(13)。
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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人FGF-19抗体包被于微孔板上,样品和标准品
中的人FGF-19会与固定在板上的抗体结合,接着加入生物素化的抗人FGF-19检测抗体进
行 孵 育 , 洗 涤 去 除 未 结 合 的 物 质 后 , 加 入 链 霉 亲 和 素 标 记 的 辣 根 过 氧 化 物 酶
(Streptavidin-HRP) 孵育。洗涤未结合试剂后,加入TMB底物溶液(显色剂)。溶液颜色
与结合的目标蛋白成正比;加入终止液;用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
仅供科研使用,不可用于体外诊断;
该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本;
请在试剂盒有效期内使用;
不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用;
样本值若大于标准曲线的最高值,应将样本用标准品稀释液(1×)稀释后重新检测;
检测结果的不同可由多种因素引起,包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板
技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。
III. 优势
A. 精确度
板内精确度(同一板内不同孔间的精确度)
已知浓度的三个样本,在同一板内分别检测20次,以确定板内精确度。
板间精确度(不同板之间的精确度)
已知浓度的三个样本,在不同板中分别检测20次,以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 87.5 200.2 566.9 88.3 201.6 569.5
标准差 2.2 4.3 14.6 2.4 4.5 13.4
CV% 2.5 2.1 2.6 2.7 2.3 2.4
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人FGF-19,测定其回收率。回收率范围
在 102.4-121.3%,平均回收率在112.6%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人FGF-19,测定其回收率。回收率范围在
101.5-113.5%,平均回收率在105.8%。
C. 灵敏度
人FGF-19的最低可测剂量(MDD)一般小于3.86 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的E.coli表达的高纯度重组人FGF-19蛋白所校正。
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