Human CD47 Valukine ELISA Kit

Human CD47 Valukine ELISA Kit

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产品信息及操作手册
人 CD47 ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL135
适用于定量检测天然和重组人 CD47 的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

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I. 背景
CD47，也称为整合素相关蛋白（IAP）和OA3，是免疫球蛋白超家族中一个40-60kda
的非典型糖基化成员（1, 2）。它在几乎所有的细胞类型中均有表达，包括红细胞（3）。
CD47与TSP-1和SIRPα结合，并与CD36和αvβ3形成膜复合体（4-6）。成熟的人CD47
是 一个 含有 305个 氨基 酸 (aa)的 五跨 膜糖 蛋 白。 它包 含一 个123 氨 基酸 的胞 外 区域
（aa19-141），其特征是存在一个V形Ig样结构域（aa19-127），和一个与Giα亚单位相
互作用的34aa的C末端胞质尾。三种剪接异构体发生在aa293-323位置上。人CD47与小
鼠、猪和犬CD47的aa同源性分别为61%、71%和66%（7）。
广泛表达的CD47与巨噬细胞、中性粒细胞和T细胞上的SIRP家族成员结合（8, 9）。
这种相互结合作用能阻止巨噬细胞介导的健康CD47表达细胞的清除，并促进免疫细胞在
血管内皮细胞上的迁移（8-11）。CD47-SIRPα相互作用具有特异性，这种缺乏跨种相互
作用的现象与异种移植排斥反应有关（12）。同时，可调节一系列细胞活动，包括血小
板活化、细胞运动和粘附，以及白细胞粘附、迁移和吞噬作用（13）。

II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人CD47单抗包被于微孔板上，样品和标准品中
的人CD47会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；加入生物素标记的抗人CD47
多抗，未结合的抗体被洗去；溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪
测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本和人血清样本；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释剂（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技
术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

III. 优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板中分别检测20次，以确定板间精确度。
板内精确度 板间精确度
样本 1 2 3 1 2 3
平均值 (pg/mL) 179.6 653.6 3093.6 182.4 668.0 3135.4
标准差 6.4 15.0 69.5 9.8 28.0 99.9
CV% 3.6 2.3 2.2 5.3 4.2 3.2
B. 回收率
在细胞培养基样本中掺入检测范围内不同水平的人CD47，测定其回收率。回收率范围在
97.7-117.1%，平均回收率在109.9%。
在人血清样本中掺入检测范围内不同水平的人 CD47，测定其回收率。回收率范围在
86.4-109.6%，平均回收率在97.8%。
C. 灵敏度
人CD47的最低可测剂量（MDD）一般小于6.83pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对应
浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems生产的NS0表达的高纯度重组人CD47蛋白所校正。