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- 英文名:
CHO转染试剂与蛋白表达系统I(贴壁含血清培养)
- 规格:
1ml
CHO转染试剂与蛋白表达系统I(贴壁含血清培养)由百代生物研发生产的
产品简介:
由百代生物研发生产的 CHO细胞系是目前在重组蛋白表达中应用最广的一类宿主细胞。CHO可贴壁培养,也可悬浮培养。不同的培养方式培养基不同,适用的质粒/DNA转染试剂不同。尽管CHO细胞在重组蛋白表达方面的应用越来越广,但国内目前还缺乏高效的CHO质粒转染和表达系统。特别是悬浮培养的CHO细胞,质粒转染和蛋白表达效果很不理想。星启百代研发团队经长期努力,研发成功了可高效转染CHO的转染试剂和配套的蛋白表达系统。其中,Starvio CHO转染试剂与蛋白表达系统I主要用于贴壁培养的CHO细胞在含有血清的普通培养基中的转染与表达;Starvio CHO转染试剂与蛋白表达系统II主要用于悬浮培养的CHO细胞在无血清培养基中的转染与表达。
产品特点:
·可高效转染贴壁培养的CHO细胞,在CHO细胞中的转染阳性率可高达80%以上;
·抗血清干扰性能显著,血清不影响转染效果;
·细胞毒性低,转染后4-6小时不需要换液。
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文献和实验效率(血清会影响复合物的形成)。 转染用的培养液可以含血清也可以不加,如加血清则应在DNA-阳离子脂质体复合物形成后加入,转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 对于对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞,建议使用专用转染试剂。条件允许情况下,可以用无血清培养基代替PBS洗细胞两遍,注意洗的时候要轻,靠边缘缓缓加入液体,然后不要吹吸细胞,而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害,细胞又损失一部分,加了脂质体后,细胞受影响就更大了,死亡细胞会增多。 02培养基中的抗生素(PS) 抗生素(如青霉
到细胞完全从壁上脱落下来为止。 (4) 加入1ml的含血清培养基终止反应。 (5) 用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。 (6) 将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。 (7) 用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。 (8) 将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。 (9) 将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。 2、细胞转染 (1)转染试剂的准备 A. 将400ul去核酸酶水加入管中
用一些。培养细胞到汇合度为50—60%,用PBS或者HBS 稀释样品蛋白,稀释的样品直接加入独立包装的BioTrek管中(转染试剂是冻干在管壁上的,便于运输保存和使用)溶解混匀,温育5分钟,振荡3—5秒,加入无血清培养基混匀。去掉细胞中的培养基(可用无血清培养基洗一次)并换入无血清培养基,加入转染试剂盒和蛋白质混合物。保温孵育4小时,通常多数细胞已经可以检测到目的蛋白进入细胞,当然可以温育更长的时间,不过4小时以上最好加一倍体积含20%血清的培养基(终浓度10%),如果24小时以上就要换培养基了。这个试剂
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