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免疫学检测
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武汉金开瑞生物工程有限公司
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Western blot(WB)——蛋白印迹
WB技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用,根据显色条带的位置和强弱实现蛋白鉴定和表达分析。其具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,选用合适的内参抗体能够校正蛋白定量和上样过程中的误差,通过灰度计量可以定性或定量分析不同样品中蛋白表达情况。
Immunoprecipitation(IP)——免疫沉淀
IP技术是利用抗原抗体特异性反应纯化富集样品中目的蛋白的一种方法。通常使目标蛋白同抗体-protein A/G形成免疫复合物沉淀而得以收集,然后通过western blot检测目的蛋白。
Co-IP技术是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的蛋白一同随免疫复合物沉淀,检测两种目标蛋白质是否在体内存在相互作用,确定一种蛋白在体内的相互作用蛋白。
Immunofluorescence(IF)——免疫荧光
IF技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术,将抗体分子与一些示踪标记结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位和定量。
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)——酶联免疫吸附测定
ELISA技术以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定样品中的抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。
Chromatin immunoprecipitation assay( ChIP)—— 染色质免疫沉淀
ChIP技术是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的DNA随免疫复合物沉淀,是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。
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文献和实验染色质免疫沉淀 (ChIP) 用于检测细胞核中天然染色质内的蛋白质与 DNA 之间的相互作用。ChIP 实验首先需要将细胞固定,即将蛋白质与 DNA 相互作用交联固定到位。然后将染色质打断为片段,使用抗体对目的蛋白质以及与其结合的所有 DNA 进行免疫沉淀。最后,解交联,对沉淀 DNA 进行纯化。纯化的 DNA 可进行进一步的分析,如标准或实时 PCR、芯片或测序分析。 这些实验对染色质的完整性、蛋白质表位的质量以及免疫沉淀抗体的特异性非常敏感。尤其当目标蛋白质与 DNA
是目前公认的研究此相互作用的最佳选择,是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的核心技术之一。它的基本原理是在活细胞状态下,固定蛋白质-DNA(染色质)复合物,并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法(抗体亲和)沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的 DNA 片段,通过对目的片段的纯化与后期检测,从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。ChIP 不仅可以检测体内多种转录因子与 DNA 的动态作用,还可用来研究组蛋白的各种共价修饰(如磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等)与不同状态
线性摇床 线性摇床通过往复运动的方式,线性振动筛更具有攻击性; 广泛应用于各种电泳凝胶的固定、考马斯蓝染色、脱色时的振荡晃动、硝酸银染色的固定、染色、显影等; 适合单次混匀较少的样品,样品与空气接触面积大,使其非常适合萃取等应用。 翘板摇床 翘板摇床可在样品中产生波浪运动,提供温和的混匀效果; 应用于电泳凝胶染色/脱色样品洗涤、酶联免疫吸附(ELISA)洗脱、酶促免疫检测、蛋白合成、杂交印迹/洗脱、免疫沉淀、蛋白免疫印迹(Western Blot)等,同时可用于细胞培养及细胞膜转移,且可放
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