ELISA试剂盒合作开发| ELISA检测试剂盒定制| 定制

ELISA (酶联兔疫测定)是酶兔疫测定技术中应用最广的技术，其基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。ELISA可用于测定抗原， 也可用于测定抗体。⾦开瑞可根据您的个性化需要开发特定ELISA试剂盒，可采⽤ELISA夹⼼法（测定抗原）、间接法（测定抗体）或竞争法（测定⼩分⼦化合物）定量检测蛋⽩的含量。

服务简介
金开瑞试剂盒及胶体金服务拥有完善的ELISA试剂盒、胶体金免疫层析、荧光免疫层析开发平台，专业的研发技术人员，结合成熟的抗原、抗体研发系统，可从事科研及诊断靶点的试剂盒、胶体金的研发以及抗原和抗体的标记、样本代测、试剂盒及胶体金的组装等定制服务。

服务流程

试剂盒定制

• 订单咨询
• 项目方制定及评估
• 合同签订
• 项目启动
• 实验方案下单
• 试剂盒开发
• 每周进度反馈
• 结果交付

胶体金定制

• 订单咨询
• 项目方制定及评估
• 合同签订
• 项目启动
• 抗原制备
• 抗体制备
• 抗原抗体配对
• 胶体金制备
• 胶体金标记
• 样品垫处理与C、T线制作
• 检测卡/条制作

服务说明试剂盒定制
 

服务内容	交付标准	周期
抗体配对测样初筛	抗体标记，单配单进行配对测样，可初步建立起标准曲线，收费100%	1-2周
ELISA检测方法的建立	提供标准曲线及线性范围，提供ELISA基本参数评价结果（LOD（最低检测限）；批内和批间变异系数；37℃加速稳定性实验）等数据	4-8周
样品的检测及评价方法的建立	提供检测样本数据（建议客户提供经验证过的阴阳性样本作为对照，试剂盒检测限：根据目标检测蛋白在样本的含量及客户要求）	2-3周
成品试剂盒	定制的ELISA试剂盒成品，可提供2-5个成品试剂盒（包被好的酶标板及配套的试剂盒组分等）	3-5个工作日

胶体金定制
 

服务内容	标准	周期
抗体配对测样初筛	抗体标记并进行配对测样，可初步建立起标准曲线，收费100%	1-2周
配对抗原抗体工作条件的确定	确定抗原划膜条件、抗体标记条件；确定试纸条检测标准品的检测浓度	1-2周
样本前处理方法的确定	确定样品前处理方法，提供检测样品数据（图片形式）	1-2周
胶体金卡性能评价	提供最终产品稳定性、重复性数据及交叉反应率（图片形式）	2-3周
成品检测卡	200条成品检测卡提供给客户	1-2周

案例展示

项目背景

客户提供：目标蛋白基因序列

客户要求：定制可用于ELISA试剂盒生产的抗体原料

项目进程：经过技术支持前期跟客户之间的详细沟通，得知该客户需要达到诊断检测的要求，希望能开发出符合预期的ELISA试剂盒，如果开发出较好的原料，可以进一步进行化学发光以及胶乳等产品研发。鉴于此项目工作量大，要求较高，特地组建项目小组，由专人分别负责抗原，抗体以及质控平台，并详细制定了每一步的执行方案。抗原部分，分别采用了大肠和酵母表达系统的重组蛋白+天然抗原共3种免疫原；抗体筛选阶段，运用我司引进的上清阶段表位分组的技术，对大量阳性克隆进行分组，为后期的配对提供了强有力的支撑；最后到达质控平台的抗体原料经过检测限标曲调试、热稳、小试、中试、大试以及同类指标的交叉反应等方面验证了抗体批内批间的变异系数，对抗体对的性能做了全面的评估。

部分结果展示

1、抗体滴度

根据客户要求，最后共获得4株单抗1#2#3#4#，4株抗体浓度统一稀释到1mg/mL后再进行梯度稀释，下表为ELISA检测结果：

抗体稀释度	1#	2#	3#	4#
1/1000	2.649	2.656	2.746	2.707
1/5000	2.547	2.555	2.714	1.162
1/25000	2.414	1.139	1.347	0.383
1/125000	1.139	0.236	0.339	0.153
1/625000	0.255	0.155	0.155	0.145
1/3125000	0.103	0.093	0.084	0.085

2、抗原识别

**1#2#3#鼠单抗分别作为包抗，4#鼠单抗标记HRP为检抗，**4株鼠单抗均可识别天然样本：

样本	1#	2#	3#
标准品100ng/ml	2.301	2.311	2.359
标准品10ng/ml	2.276	2.167	2.036
标准品1ng/ml	1.049	0.513	0.641
正常血清①原液	2.151	2.141	1.442
正常血清①1:10	2.151	1.365	0.444
正常血清②1:10	2.266	1.554	0.695
PBS	0.177	0.138	0.192

产品应用

1、ELISA

所开发的4株单抗有多种配对组合方式，如2#为包抗，1#鼠单抗标记HRP为检抗，ELISA标曲如下图：

2、化学发光

2#为包抗，1#鼠单抗标记HRP为检抗，标曲如下图：

3、胶乳增强免疫比浊

将几种单抗混合包被于胶乳颗粒，制备成胶乳试剂，然后检查不同浓度蛋白校准品，线性拟合如下图，相关性很好。

4、IHC

结论

金开瑞抗体平台的研发团队具备多年诊断原料开发经验，可承接诊断类抗体相关业务。该项目所制备的**单克隆抗体可高灵敏，高特异的检测人血清中的**蛋白，可用于 ELISA、化学发光、胶乳诊断试剂盒的开发。最终给客户交付了一份满意的答卷，并建立了长久的合作关系！
 

附ELISA实验操作步骤

 

1. 包被抗原：使用抗原或抗体（若检测抗体）包被在酶标板上，一般在4℃过夜。

2. 清洗：用洗涤缓冲液清洗板子数次，去除未结合的未包被物质。

3. 加样本与标准：加入稀释后的样本和标准品到各孔中，孵育一定时间（通常37℃）。

4. 再次清洗：清洗去除非特异性结合的抗体或抗原。

5. 加入酶标记抗体： 加入酶标记的抗体（若检测抗原），再次孵育。

6. 清洗：最后清洗，去除未结合的酶标抗体。

7. 加入底物显色： 加入酶底物，酶催化下产生颜色变化。

8. 终止 反应： 加终止液停止酶反应，固定颜色。

9. 读数： 使用酶标仪读取各孔的OD值，比较标准曲线定样本中抗原浓度。

注意事项

• 对照：需设阴性、阳性、空白对照。
• 操作：保证所有步骤的温度、时间、浓度、体积精确。
• 洗涤彻底，避免交叉污染。
• 仪器校准，保证数据准确性。

ELISA是一种灵活的检测方法，不同的实验类型（如竞争ELISA、夹心ELISA等）会有细节上的变化，但基本流程相似。