ELISA试剂盒/胶体金合作开发（定制）| ELISA试剂盒

金开瑞试剂盒及胶体金服务拥有完善的ELISA试剂盒、胶体金免疫层析、荧光免疫层析开发平台，专业的研发技术人员，结合成熟的抗原、抗体研发系统，可从事科研及诊断靶点的试剂盒、胶体金的研发以及抗原和抗体的标记、样本代测、试剂盒及胶体金的组装等定制服务。

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• 服务说明
• 案例展示
• 如何订购

• 订单咨询
• 项目方制定及评估
• 合同签订
• 项目启动
• 实验方案下单
• 试剂盒开发
• 每周进度反馈
• 结果交付

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• 项目方制定及评估
• 合同签订
• 项目启动
• 抗原制备
• 抗体制备
• 抗原抗体配对
• 胶体金制备
• 胶体金标记
• 样品垫处理与C、T线制作
• 检测卡/条制作

项目背景

客户提供：目标蛋白基因序列

客户要求：定制可用于ELISA试剂盒生产的抗体原料

项目进程：经过技术支持前期跟客户之间的详细沟通，得知该客户需要达到诊断检测的要求，希望能开发出符合预期的ELISA试剂盒，如果开发出较好的原料，可以进一步进行化学发光以及胶乳等产品研发。鉴于此项目工作量大，要求较高，特地组建项目小组，由专人分别负责抗原，抗体以及质控平台，并详细制定了每一步的执行方案。抗原部分，分别采用了大肠和酵母表达系统的重组蛋白+天然抗原共3种免疫原；抗体筛选阶段，运用我司引进的上清阶段表位分组的技术，对大量阳性克隆进行分组，为后期的配对提供了强有力的支撑；最后到达质控平台的抗体原料经过检测限标曲调试、热稳、小试、中试、大试以及同类指标的交叉反应等方面验证了抗体批内批间的变异系数，对抗体对的性能做了全面的评估。

部分结果展示

1、抗体滴度

根据客户要求，最后共获得4株单抗1#2#3#4#，4株抗体浓度统一稀释到1mg/mL后再进行梯度稀释，下表为ELISA检测结果：

2、抗原识别

**1#2#3#鼠单抗分别作为包抗，4#鼠单抗标记HRP为检抗，**4株鼠单抗均可识别天然样本：

产品应用

1、ELISA

所开发的4株单抗有多种配对组合方式，如2#为包抗，1#鼠单抗标记HRP为检抗，ELISA标曲如下图：

2、化学发光

2#为包抗，1#鼠单抗标记HRP为检抗，标曲如下图：

3、胶乳增强免疫比浊

将几种单抗混合包被于胶乳颗粒，制备成胶乳试剂，然后检查不同浓度蛋白校准品，线性拟合如下图，相关性很好。

4、IHC

结论

金开瑞抗体平台的研发团队具备多年诊断原料开发经验，可承接诊断类抗体相关业务。该项目所制备的**单克隆抗体可高灵敏，高特异的检测人血清中的**蛋白，可用于 ELISA、化学发光、胶乳诊断试剂盒的开发。最终给客户交付了一份满意的答卷，并建立了长久的合作关系！
 

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ELISA实验的操作步骤通常包括以下内容：

1. 试剂准备：

• 选择适用的ELISA试剂盒，确保质量和有效期良好。
• 根据实验需求，准备酶标抗体、底物溶液和终止液。

1. 样本处理：包括样本的采集、保存、稀释和加样。在加样过程中，要确保加样的量和均匀性，避免误差和偏差，同时要注意避免交叉污染和挥发。
2. 包被：选择适用于ELISA的微孔板，将高质量的ELISA实验抗体按推荐浓度稀释或寻找最适合的浓度，并加入包被缓冲液，然后将微孔板放置在恒温箱中进行孵育。
3. 孔板孵育：将孔板封闭以防干燥，并放置在恒温箱中进行孵育。根据实验需求，选择合适的孵育温度和孵育时间。
4. 洗涤：在孵育后，使用洗涤缓冲液洗涤孔板，以去除未结合的抗原或抗体，避免对实验结果的干扰。此步骤需要重复几次，以确保洗涤效果。
5. 酶偶联二抗：将酶偶联的二抗加入孔板中，与样品接触，然后重新封闭孔板并放置在恒温箱中孵育。
6. 显色反应：加入显色液（如TMB底物）到每个孔中，使其与酶反应产生染色物。孔板重新封闭后，放置在暗处进行孵育。
7. 反应终止：加入停止液到每个孔中，以停止酶反应。停止液会改变酶的活性，使产生的染色剂不再发生颜色变化。
8. 测量：使用酶标仪测量吸光度，以确定染色剂的浓度，从而得出实验结果。