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荧光法多药物抗性MDR检测试剂
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12个月
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肿瘤细胞对细胞药物的耐药性被认为是化疗成功的主要障碍之一。有些肿瘤最初是耐药的,对细胞抑制药物治疗没有反应;另一些肿瘤最初反应良好,但最终会再生并产生耐药性。这种现象可能是由所给抗肿瘤药物诱导的基因突变引起的,也可能代表恶性肿瘤中已存在的耐药细胞群的选择。多药耐药(MDR)是多种化疗失败的主要因素。在过去的几年中,人们普遍认为化疗耐药性与至少两个ATP依赖的药物外排的过度表达有关。这些细胞膜蛋白,称为P-糖蛋白(Pgp,MDR1)和多药耐药相关蛋白(MRP1)是ABC转运体家族的成员。我们的检测试剂盒使用荧光MDR指示剂来检测这两种MDR活性。这种疏水性荧光染料分子迅速穿透细胞膜并保留在细胞内。短时间培养后,细胞内游离染料浓度明显增加。在表达MDR1和/或MRP1的细胞中,该染料被MDR转运体挤压,从而降低细胞荧光强度。然而,当其挤压被干扰MDR1和MRP1活性的试剂阻断时,其细胞荧光强度明显增加。我们的MDR检测试剂盒提供了一个优化的检测方法的所有必须成分。该方法可在96孔或384孔微孔板中进行,且易于自动化。该试剂盒是高通量筛选MDR抑制剂或鉴定具有高水平MDR活性细胞的理想试剂盒。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒。
样品实验方案
简要概述
溶液配制
储备溶液配制
MDR指示剂储备溶液:将20 µL(#36340-1板)或200 µL(#36341-10板)添加到MDR指示剂(组分A)中,并充分混合。 注意:20 µL MDR指示剂原液足以装满一块板。 未密封的MDR指示剂原液可以分装,并在<-20℃下保存1个月。 避光,并避免反复冻融。
工作溶液配制
MDR染料加载溶液:将20 µL的MDR指示剂储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(组分C)中,并充分混合。 注意:MDR染料加载溶液足以装满一块板,并且在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
图示
图1.环孢菌素A对MCF-7 / ADR细胞中P-gp的抑制作用。 环孢菌素A浓度的增加导致荧光信号的增加,这是由于P-gp的抑制所致,从而增强了MDR指示剂染料在细胞内的积累。 EC50 = 2.4μM(用试剂盒测量)。
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