细胞活性检测试剂盒 *蓝色荧光*

Cell Meter 细胞活性检测试剂盒 蓝色荧光

货号	22785	存储条件	f/l
规格	500 Tests
Ex (nm)	360	Em (nm)	445
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞活性检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter细胞活性检测试剂盒 *蓝色荧光* 使用一种专属型染料，一旦进入活细胞中，其荧光强度增强。这种染料是一种疏水性复合物，可以轻易地进入完整的活细胞。通过细胞内酯酶水解弱荧光性底物，产生具有强烈荧光的亲水性产物，并且可以在保持在细胞质中。这种酯酶的活性与活细胞数量成比例关系，因此酯酶水解荧光底物形成的产物的荧光强度与活细胞数量相关。生长在培养板中的细胞可以被染料，且在不到两小时内就可以完成定量分析。本检测法比四唑盐或者基于Alarmar Blue的检测更加强大、稳定。它可以用于许多荧光实验平台的高通量分析中，例如微孔板分析，免疫组化和流式细胞术。它在许多研究中非常有用，包括细胞粘附性、趋化作用、药物抗性、细胞活性、细胞凋亡和细胞毒性研究。本试剂盒提供所有必需组分和最佳检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞，也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中，每孔用试剂100ul，本试剂盒提供的试剂足以进行500次检测；384微孔板中，每孔加试剂25ul，本试剂盒提供的试剂足以进行2000次检测。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞活性检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

用测试化合物制备细胞
添加相同体积的CytoCalcein Blue，AM工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
在室温或37°C孵育1小时
在Ex / Em = 360/450 nm（截止= 420 nm）监测荧光强度（底部读取）

 

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
CytoCalcein Blue，AM原液：
将20μLDMSO（组分B）加入到CytoCalcein Blue，AM（组分A）的小瓶中，并充分混合以制备CytoCalcein Blue，AM储备溶液。 注意：20μL的CytoCalcein Blue，AM原液足以用于一个平板。 避光。 存放时，密封管。

 

2.工作溶液配制

将全部内容物（20μL）的CytoCalcein Blue，AM储备溶液加入10mL测定缓冲液（组分C）中，并充分混合以制备CytoCalcein Blue，AM工作溶液。 这种CytoCalcein Blue，AM工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：如果CHO细胞等细胞含有促进荧光染料随时间泄漏的有机阴离子转运蛋白，应制备丙磺舒储备溶液，并加入到加样缓冲液中，最终孔内工作浓度范围为1到2.5 mM。 将未使用的丙磺舒储备溶液等分并储存在≤-20℃。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.根据需要用测试化合物处理细胞。注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后加入100μL/孔（96孔板）和25μL/孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2.添加100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的CytoCalcein Blue，AM工作溶液。

3.将板在室温或37°C孵育1小时，避光。 （孵育时间可以从15分钟到过夜。我们得到了最佳结果，孵育时间少于4小时）。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。注意：装载后请勿清洗电池。注意：对于非粘附细胞，建议在孵育后以800 rpm的速度离心细胞板2分钟。

4.用Ex / Em = 360 / 450nm（截止= 420nm）的荧光板读数器（底部读取）监测荧光强度。

 

数据分析

从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算CHO-K1细胞样品。

图1.用Cell Meter Cell Viability Assay Kit测量CHO-K1细胞数量响应。 将0至5,000个细胞/孔/100μL的CHO-K1细胞在Costar黑壁/透明底96孔板中接种过夜。 将细胞与100μL/孔的CytoCalcein Blue，AM染料 - 工作溶液在室温下孵育1小时。 用NOVOstar仪器（来自BMG Labtech）在Ex / Em = 360 / 450nm处测量荧光强度。 如所示，荧光强度与细胞数成线性关系（R2 = 1）。