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P4164-500MG
RNA干扰技术已经成为研究基因功能的有力工具。任何一个RNA实验的成功都有赖于:
1. 高质量的siRNA(或shRNA表达载体)
2. 有效的转染方法
目前哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法(例如,显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。
阳离子脂质体转染试剂的选择对于利用siRNA介导的基因沉默实验来说同样是至关重要的。没有高效的转染,就不能有效的引发相应的细胞响应,会直接影响同一siRNA的抑制效果。只有将siRNA高效转染哺乳动物细胞,才能更真实的检测siRNA干扰基因表达的效果。
如何选择最适合的转染试剂和转染条件,往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。siRNA专用转染试剂推荐使用吉玛公司的转染试剂―RNAi-Mate 。
吉玛公司的转染试剂―RNAi-Mate
RNAi-Mate适用于核酸的体内和体外操作,可应用于DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA的转染,也可应用于DNA/siRNA的共转染操作。现有的商用siRNA转染试剂已不能满足高通量siRNA转染试验的需求。因此吉玛公司公司推出RNAi-Mate转染试剂,一种新的高效siRNA转染试剂。
应用领域:
- 原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
- siRNA高通量转染试验
- DNA转染;DNA和siRNA的共转染
- 贴壁细胞和悬浮细胞转染
- 核酸(siRNA、DNA、RNA)的体内导入试验
特点:
- 不必更换培养基,操作简便易行,重复性好,可在半小时内完成操作
- 介导siRNA高转染细胞和体内高效导入
- 在含血清培养基中也能表现高转染效率
- 可在室温下运输,在4℃下可长期保存
- 细胞毒性低
- 适用细胞广泛;即用型试剂,可在含有抗生素的完全培养基中转染,操作格外简单方便简介
- 是一种基于脂质的转染试剂,专门用于转染,确保没有RNAse活性。
| 目录号 |
产品说明 |
规格 |
价格 |
交货期限 |
| C-01 |
RNAi-Mate转染试剂 |
0.1mL(10次/35mm,1mg/mL) |
¥160 |
2个工作日 |
为了满足客户对不同细胞转染的需求,吉玛公司代售invitrogen公司的lipofectamine2000
| 目录号 |
产品说明 |
规格 |
价格 |
交货期限 |
| C-02 |
Lipfectamine2000 |
0.1mL |
¥250 |
2个工作日 |
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文献和实验【原创】采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因治疗研究
的高表达现象,这表明了FAK 可能是一种潜在的肿瘤治疗的靶点。许多研究小组报道了在体外多种细胞系转染FAK 反义RNA 或 RNAi 的研究,观察到FAK 反义RNA 或 RNAi能有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。然而至今还没有关于在体内的肿瘤中,进行以FAK 为靶点的治疗研究。由于体内生理的复杂性,体外的结果并不能代替体内的现象,为此有必要开展体内研究,为临床治疗提供必要的基础。因而,我们构建了以FAK 为靶向的RNAi 表达质粒。首先,在体外采用GenEscort™ Ⅲ试剂转染该质粒能有效抑制
抑制研究。(如果克隆到载体后就可以了)三、siRNA的转染将siRNA、siRNA表达载体或SECs导入哺乳动物细胞中是诱导RNAI发生的关键。有许多转染试剂可供选用,最常用的是脂质体转染试剂。某些情况下电穿孔法亦可用,但易导致较高的细胞毒性反应。对于同一细胞系,使用不同的转染试剂或方法,其效率往往会有所不同;而对于不同的细胞系,使用同一种转染试剂或方法,效果亦会不同。因此在实验过程中,有必要尝试多种试剂或方法来确定最优条件。转染效率可通过测定细胞的密度,转染的时间和siRNA与转染试剂的比例
50 代以内的细胞。50 代以后的细胞不建议采用,因为转染效率会随时间的推移而下降。 6.避免使用抗生素 从铺盘直到转染后 72 小时内,应避免使用抗生素。在转染的细胞中,已经显示出抗生素积累到了毒性水平。为获得最佳的siRNA输送效果,某些细胞和转染试剂需要无血清的条件。我们建议在正常的生长培养基和无血清培养基中均做转染试验,以确定每个转染实验的最佳条件。 7.使用优化的试剂转染 siRNA 请使用您的细胞类型适用的最佳 siRNA 转染试剂和试验方案。对于 siRNA 试验,转染试剂的选择
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