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能够转染高培养浓度细胞(70%�90%) 的COS 和 HEK293 细胞系特异的转染试剂使产生最高的报告基因 活性成为可能。这一结果可以通过无需培养基变化或额 外的用于高转化效率的增强子的简单的三步法操作步骤 获得。与常规转染试剂比较,细胞系特异的转染试剂表 现出更杰出的性能。
脂质试剂专为特异地提高COS 细胞的转染效率而设计。COSFectin 脂质试剂在COS 细胞系在90�95%转化效率同时保证低的细胞毒性。
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文献和实验对于试验成功与否至关重要。最关键的是,应使用专门配制、输送小分子 RNA 的转染试剂(大部分市售的转染试剂设计用于大型质粒 DNA,而不是小 RNA 分子)。此外,仅有部分试剂设计用于特定细胞系的转染,而多数试剂的特异性范围较广。Lipofectamine RNAiMAX 是专为将 siRNAs 高效转染真核细胞而设计的转染试剂。 8.使用一个适当的阳性对照来优化转染和检测条件 对于大部分细胞,管家基因适合作为阳性对照。向靶标细胞转染几个浓度的、对您所选择的阳性对照特异的 siRNA。(这也适用
【原创】采用GenEscort™ 转染试剂实施RNA干扰(RNAi)实验进行肿瘤的基因治疗研究
以FAK为靶点的RNA干扰的黑色素瘤基因治疗 RNA 干扰(RNA interference, RNAi)是由双链RNA 介导的序列特异性的转录后基因沉默现象。它通过识别与之序列相同的mRNA 来使特定基因在转录后水平被降解。RNAi 技术具有高的基因沉默效率和特异性, 为基因治疗等研究领域提供了一个新的研究手段。黏着斑激酶(FAK)是一种定位于黏着斑的非受体型酪氨酸激酶,参与调控细胞的运动和增殖等生命功能。FAK 在肿瘤的生成和恶化过程中起重要作用,在多种肿瘤细胞系中均观察到了FAK
抑制研究。(如果克隆到载体后就可以了)三、siRNA的转染将siRNA、siRNA表达载体或SECs导入哺乳动物细胞中是诱导RNAI发生的关键。有许多转染试剂可供选用,最常用的是脂质体转染试剂。某些情况下电穿孔法亦可用,但易导致较高的细胞毒性反应。对于同一细胞系,使用不同的转染试剂或方法,其效率往往会有所不同;而对于不同的细胞系,使用同一种转染试剂或方法,效果亦会不同。因此在实验过程中,有必要尝试多种试剂或方法来确定最优条件。转染效率可通过测定细胞的密度,转染的时间和siRNA与转染试剂的比例
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