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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
2年
- 英文名：
FDC-P1细胞
- 库存：
10000
- 供应商：
上海信裕
- 保存条件：
37度
培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置：DMSO18ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个， 常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml小鼠骨髓细胞、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，保种管 所需试剂：gibco高糖培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，苯扎溴氨，75%酒精…… 实验前准备： 所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。 首次传代前细胞的复苏，首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边，待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。
细胞培养应注意的问题：
细胞培养过程中，从实验室的设计小鼠骨髓细胞到实验过程中的操作，都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻，所以无论从实验室的设计，还是使用的物品及细胞培养的操作过程，都要注意保持无菌环境。
冷冻保存细胞之方法：
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30~60分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。 冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度：
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
应如何避免细胞污染：
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
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文献和实验小鼠骨髓单细胞悬液制备流程 颈椎脱臼法处死小鼠，放在75%酒精中浸泡5 min。提前于超净台上准备一个消毒托盘（可用无菌口罩或者用浸满酒精的纱布代替），取出小鼠并铺于消毒托盘上。 在无菌环境下取小鼠的后肢骨。用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤，用眼科剪小心剪开，并分离两下肢的皮肤。将皮肤往下在脚踝处剪断，往上在髋关节处剪断，游离出小鼠的两条后肢。 小心剥离肌肉（肌肉两端的白色坚韧组织为肌腱，可以顺着肌腱分离，肌肉主要靠肌腱与关节相连），分别剪下Femurs（股骨）和Tibias（胫骨
微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒，大小相当于细胞直径的1/20～1/5，呈圆形或杏仁状，其染色与细胞核一致，在间期细胞中可以出现一个或多个。一般认为微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质。所以，微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。微核可以出现在多种细胞中，但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别。由于红细胞在成熟之前
啊；性别方面公母不限，经典版本说公的好，公的壮实，骨头大）。 2. 冲骨髓细胞，我冲出来的骨髓细胞永远没有文献上说的那样多，但不影响大局，我一次用两只，怕出意外少了细胞，论坛里有战友说不要混一起，我不知道具体原因，盼赐教。 3. 细胞计数，不去红细胞！（不知是好是坏，文献说去红细胞会把一些祖细胞也去掉了）记数，计数只记白细胞（形态学区分，红细胞无核较小，目前我的眼睛目前还在为此积累经验），2×10e6（似乎太低，这套方案作者是一皿养到第12天的，所以我个人觉得看你在哪天收细胞做下游实验
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