PLT,96WL,RB,ULA,W/LID,IND,S,1/

最全面的MTT大汇总

最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。PBS配方:Nacl 8gKcl 0.2gNa2HPO4 1.44gKH2PO4 0.24g调ph 7.4定容1L关于细胞的接种(铺板)细胞过了30代以后就不要用了,因为状态不好了;培养板要用好的（最好进口板），不好的板或重复利用的板只可做预实验。接种时最好按照预实验摸索出的密度

重组腺病毒构建、扩增及纯化

CsCl 1.2 （26.8 g + 92 mL 10 mM Tris-HCl，pH=7.9），再小心加入病毒上清液至体积达到20ml。平衡后，4℃下 23000rpm离心90min （SW28转头），用注射器抽吸下层蓝白色病毒带） 4、病毒透析去盐：配置透析液（10 mM Tris pH 8.0，2 mM MgCl2，5% sucrose），灭菌处理。4℃透析，更换3次透析液，可基本去除CsCl，病毒保存于-80℃。 六、病毒滴度测定（TCID50） 1 、细胞准备：96孔板中接种100μl

重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作

，弃上清。 2  以灭菌PBS重悬沉淀，反复冻融4次。4℃下7000g离心5min.病毒纯化至少需要30瓶75cm2 方瓶细胞。 3  CsCl连续梯度离心纯化：50ml离心管中称量4.4g CsCl，加入8ml病毒裂解上清液，混匀，体积约为10ml。转移至12ml超速离心管（用于SW41转头）中，覆盖约2ml矿物油。平衡后，10℃下32000 rpm离心18-24hr，用注射器抽吸离心出的病毒带。 （也可CsCl不连续梯度离心：20ml超速离心管中缓慢加入8ml CsCl