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微核试验
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文献和实验体外哺乳类细胞微核试验原理及注意事项微核试验是遗传毒性研究标准组合试验之一,在食品,化学品,药品,农药,饮用水等多类产品的遗传毒性评价方面得到广泛应用。与体内实验相比,体外微核试验更加简单快速,避免动物个体差异影响,灵敏度高。体外微核试验主要包括体外哺乳类细胞微核试验,人外周血淋巴细胞微核试验,肝原代细胞微核试验等类别。体外哺乳类细胞微核试验是一种用于检测哺乳类细胞在受试物处理后是否产生微核的遗传毒性检测方法。该试验适用于检测有丝分裂细胞暴露于受试物期间或之后致染色体断裂和诱发非整倍体的能力
微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒,大小相当于细胞直径的1/20~1/5,呈圆形或杏仁状,其染色与细胞核一致,在间期细胞中可以出现一个或多个。一般认为微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质。所以,微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。微核可以出现在多种细胞中,但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别。由于红细胞在成熟之前
by Fenech标准选择双核细胞适合MNI,只有每个核的核边界分离,才可以获得一个双核细胞。此外,双核细胞的胞质膜必须完整和清楚的与从相邻细胞分离。因此,收集mESCs细胞时胞质膜必须没有损伤。 单个淋巴细胞或细胞株培养的微核试验在收获过程中不需要低渗处理。低渗处理,可能会导致细胞坏死和凋亡,使他们无法检测。另一方面,mESCs有一个大核被较窄的细胞质包围。根据上述所述mESCs进行低渗处理是必要的,不能省略。 收集细胞和制作切片 1.将ES细胞生长于含有4 µg/ml
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