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- 2025年12月09日
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荧光素酶报告基因检测
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凯基生物
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文献和实验水仙子2005 我想分别构建FOXO1 和 SIRT1基因启动子/luciferase报告质粒，用于研究X基因是否能够调控这两个启动子。但是不知道该扩增两个基因启动子区域的哪一段插入pGL3（promega）中。 另外，promega的pGL3有pGL3-basic和pGL3-enhancer，该选择哪个？ 水仙子2005 继续求助 sxd5266 pGL3-basic 没有SV
【求助】请教一个关于双荧光素酶报告基因检测系统中共转染两种报告基因质粒的比例的问题？
lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒，但是我不知道两种质粒间的比例是多少，有哪位前辈做过这方面实验的，请帮我指点一下，谢谢了 xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL－TK（海蜃素荧光素酶）的荧光值要高一些，我转20ng/孔（24孔板），作为内参.pGL3（萤火虫荧光素酶）的荧光值低一些，我转0.4ug/孔（24孔板）然后0.4ug的调整质粒。这样的话，萤火虫荧光素酶
度和线性应答范围， 必须注意不要超过这些范围，内源性细胞活力也会干扰这类报告基因的使用。许多类型的细胞有内源β-Gal或GUS表达，不利于准确定量报告基因表达， 胞内去乙酰酶活力干扰CAT活力测试。尽管在高温下预处理细胞裂解液，会降低内源性β-Gal和CAT测试的干扰，但这些处理也会快速失活荧光素酶。因此，在此类双报告基因检测中， 必须以不同的步骤分别处理共转染的细胞裂解液。理想的双报告基因方法应该使用户能够以萤火虫荧光素酶所具有的速度，灵敏和线性范围对同一样品中的两个报告基因同时测定。这在传统的报告
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