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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称:
RT-PCR
- 提供商:
无锡菩禾生物医药技术有限公司
Real-time qPCR就是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。由于Real-time qPCR的众多优点,现在已经是生命科学领域的一项重要技术,并成为基因表达差异和文章发表不可或缺的部分。real-time qPCR输出的数据不同于常规PCR电泳检测,很多没有做过real-time qPCR的研究者常常感到高深莫测,不知从何入手;甚至一些做过一些实验的研究者也会对数据处理分析感到迷惑。很多时候,尽管知晓qPCR的原理和基本操作,仍然浪费时间和精力,而得不到好的结果或对大量的数据不知所措。
逆转录-聚合酶链反应(Real-time qPCR) 服务流程
1、引物设计与合成
2、DNA/RNA抽提
3、反转录(针对RNA )
4、上机定量分析
结果展示
服务的优势
菩禾生物的real-time qPCR技术服务,根据实验目的,设计实验方案(相对定量或绝对定量;SYBR Green I或Taqman探针方法),用完全按照符合国际标准(MIQE)的real-time qPCR试剂完成实验,提供符合文章发表的客观事实实验报告和原始数据。
实验周期及交付标准
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准: 总RNA(或DNA)浓度,电泳图片,扩增曲线,熔解曲线,Ct值以及数据统计分析(可选),实验报告以及剩余引物和模板(信诺金达可保存1个月)
需确认的信息
1需提供新鲜或保存完好的细胞(至少5×10^6)、组织(至少50mg)、血液(300μl)等样本材料;
2或纯化好的总RNA(OD260/OD280在1.9-2.1之间,完整性好)或总DNA(OD260/OD280在1.7-1.9之间,完整性好);
3或反转录好的cDNA不少于30μl(反转录的总RNA完整性好,纯度在1.9-2.1之间);
4同时提供待测基因序列或登录号。
5样本数量及分组信息
收费标准:
菩禾生物所有服务项目:
| 细胞平台 | 行为学检测 | 动物模型 |
| 原代细胞制备与培养 | 水迷宫检测 | 慢性胰腺炎模型 |
| 细胞培养、传代 | 十字架 | 肝纤维化模型 |
| 原代细胞传代培养 | 非酒精性脂肪肝 | |
| 细胞系STR鉴定服务 | 动物模型 | 骨质疏松模型 |
| 细胞转染 | 小/大鼠饲养 | 糖尿病模型 |
| MTT细胞增殖、活性、毒性检测 | 小/大鼠灌胃 | 眼外伤模型 |
| CCK8细胞增殖、活性、毒性检测 | 兔子饲养费 | 青光眼模型 |
| 流式细胞凋亡检测 | 大鼠灌胃 | 烧烫伤模型 |
| 流式细胞周期检测 | 小鼠灌胃 | 短肠模型 |
| 血管形成实验(非钙染/钙染) | 兔子灌胃 | 肾衰模型 |
| ROS检测 | 腹腔/肌肉给药(大小鼠) | 肾炎模型 |
| 划痕实验 | 腹腔/肌肉给药(兔子) | 尿路结石 |
| 克隆形成实验 | 尿液/粪便采集 | 高氧/低氧损伤模型 |
| 粘附实验 | 血液采集 | |
| transwell实验(迁移) | TTC染色 | 病理平台 |
| transwell实验(侵袭) | 超声检测 | 组织包埋 |
| 贴壁/悬浮细胞转细胞株构建 | 血常规检测 | 冰冻/石蜡切片 |
| 耐药细胞株筛选构建 | DR检测 | HE染色 |
| 骨组织切片 | 其他特殊染色 | |
| 分子平台 | microCT | 全扫描拍照 |
| 载体构建 | 皮下瘤模型 | 扫描电镜 |
| 细胞/组织/血液RNA提取 | 移植瘤模型 | 透射电镜 |
| mRNA/miRNA等引物设计 | 原位瘤模型 | 共聚焦拍照 |
| RT-qPCR检测 | 心肌缺血再灌注模型 | |
| CHIP检测 | 门静脉高压动物模型 | |
| EMSA检测 | 高血压动物模型 | |
| 双荧光素酶实验 | 心肌梗死动物模型 | |
| 原位杂交 | 动脉粥样硬化动物模型 | |
| 脑缺血再灌注 | ||
| 免疫平台 | 肾性高血压模型 | |
| 蛋白(核/膜/总)提取 | 主动脉弓狭窄模型 | |
| 蛋白含量测定 | 脊髓损伤模型 | |
| Western Blot检测 | 背根神经节损伤模型 | |
| COIP | 脑瘫模型 | |
| 免疫组化/荧光 | 癫痫模型 | |
| 抑郁症模型 | ||
| 行为学检测 | 肾脏缺血再灌注模型 | |
| 水迷宫检测 | 关节炎 | |
| 十字架 | 肺气肿模型 |
六、实验服务流程
无锡菩禾生物是一家专业提供生物医药技术服务和细胞整体解决方案的高科技企业。拥有CMA 质量体系认证的实验室,5大技术平台(细胞平台、分子平台、免疫平台、病理平台、动物平台),以专业、严谨、求真、高效服务理念,为全国科研工作者提供一站式技术检测服务。
公司地址:江苏省江阴市砂山路85号
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文献和实验
的 DNA 聚合酶活性:以 RNA 为模板合成 cDNA 第一条链; (2) Rnase 水解活性:水解 RNA:DNA 杂合体中的 RNA; (3)依赖 DNA 的 DNA 聚合酶活性:以第一条 DNA 链为模板合成互补的双链 cDNA. 二、RT-PCR的准备 1. 引物的设计及其原则: (1)引物的特异性决定 PCR 反应特异性。因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。 在引物设计时要充分考虑到可能存在的同源序列,同种蛋白的不同亚型,不同的 mRNA 剪切方式以及可能存在
刚刚接触RT-PCR实验,现在遇到一些问题.特向各位高人请教.我做的是关于大鼠erg,mink,KvLQT的基因表达,引物是老板按照文献给的,源自于Circulation(2000;101:2007-2014),作者是日本人.非常困惑的是没有GENEBANK的NO,对于这些引物我非常想核对,但是无从谈起.硬着头皮做了,可是发现跑出的条带不对头,与Marker比较都大了许多,erg大约是900左右,这是不是就是所谓的基因污染,我第一步提取总RNA的时候就没有做好呢?请各位帮忙分析一下.(当时胶
为模板合成cDNA第一条链; (2)Rnase水解活性:水解RNA:DNA杂合体中的RNA;(3)依赖DNA的DNA聚合酶活性:以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA. 二、RT-PCR的准备: 1. 引物的设计及其原则:(1)引物的特异性决定PCR反应特异性。因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。在引物设计时要充分考虑到可能存在的同源序列,同种蛋白的不同亚型,不同的mRNA剪切方式以及可能存在的hnRNA对引物的特异性的影响。尽量选择覆盖相连两个内含子的引物
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