人癌胚抗原（CEA）定量检测试剂盒（CLIA）

Lonto® CLIA

仅供科研使用，不得用于临床诊断

人癌胚抗原（CEA）定量检测试剂盒（CLIA）

货号：****



定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液中癌胚抗原（CEA）的浓度。




使用试剂盒前，必须仔细阅读本说明书。


中国 | 泉州市蓝图生物科技有限公司
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简介
大肠癌组织可产生一种糖蛋白，作为抗原引起患者的免疫反应，此种抗原称为癌胚抗原（carcino-embryonic antigen CEA），可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎的消化管组织中，在正常人血清中也可有微量存在。 癌胚抗原是一个广谱性肿瘤标志物，它能向人们反映出多种肿瘤的存在，对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿瘤标志物，但其特异性不强，灵敏度不高，对肿瘤早期诊断作用不明显。
CEA最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15%～53%的病人血清CEA也会升高，所以CEA[1]不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。
97%的健康成人血清CEA浓度在2．5ng/mI以下。原发性小肠癌CEA分布原发性结肠癌患者CEA增高占45－80%。除原发性结肠癌以外，腺胰癌、胆管癌、胃癌。食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤阳性率也很高，一般在50－70%。良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎和酒精性肝硬化变病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20μg/L，CEA超过20 ng/ml时往往提示有消化道肿瘤。所以测定CEA可以作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。

实验原理
本试剂盒采用双抗体夹心化学发光免疫吸附试验（CLIA）。在预包被抗人癌胚抗原（CEA）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人癌胚抗原（CEA）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的人癌胚抗原（CEA）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生辉光，在化学发光仪器上测定发光强度（RLU），发光强度（RLU）与待测样品中癌胚抗原（CEA）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中癌胚抗原（CEA）的浓度。

试剂盒限制性
1、仅供科研使用，不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高于最高标准品浓度值，请将样本适当稀释后，再重新测定。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果，检测前，请排出该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果，与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

技术提示
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是保证实验结果准确性的必要条件。
4、使用自动洗板机时，加入一个30秒浸泡的步骤，可以提高检测精度。
5、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
6、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
7、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
8、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

试剂盒组分与保存
未开封的试剂盒保存在2-8度，不得使用过期试剂盒。

组分	数量	主要成分	开封后储存
校准品	0.5ml/管	*****	2-8℃1天
包被微孔板	96T	预包被鼠抗人白介素2抗体	2-8℃14天
HRP标记抗体	6mL	HRP标记的鼠抗人白介素2抗体	2-8℃180天
发光底物液A	6mL	0.01%过氧化氢	2-8℃180天
发光底物液B	6mL	0.1%鲁米诺	2-8℃180天
30×浓缩洗涤液	20mL	0.05%Tween20	2-8℃180天
说明书	1份	--	--
自封袋	1个	--	--
不干胶	2片	--	--

其他用品
1、化学发光仪器
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml量筒
7、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择）

生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中，含有proclin-300防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。
4、戴上防护手套，实验完成后彻底洗手。

样品的采集和储存
以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。
3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。
样本收集后，不是一次检测完，请按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻。

试剂准备
1、使用前，所有的组分都要至少复温30min，确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液：从冰箱取出的浓缩洗涤液，会有结晶产生，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水，按1:30稀释，即1份的浓缩洗涤液，添加29份的蒸馏水。
3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1体积充分混合，混合后15分钟内使用。

操作程序
所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
3、设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。
4、样本孔加待测样本50μL。
5、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体50μL。
6、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育120min。
7、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。
8、将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。
9、加完底物液后的5min内，依照底物加样顺序，设置测量时间1秒/孔，在化学发光测量仪器上，测量各孔的发光强度（RLU）。

结果计算
以标准品浓度做为纵坐标，对应的发光值（RLU）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数Logistic曲线拟合（4-pl），创建标准曲线方程，通过样本的发光值（RLU），利用方程计算样品的浓度值。
如果样品被稀释，通过上述方法测的的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。

试剂盒性能指标
1、物理性能
试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。
2、剂量反应曲线线性
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.9900。
3、精密度
批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。
批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。
4、灵敏度
最低检出剂量小于******。
5、回收率
三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内回收率评估，回收率在85%-115%之间。
6、样本值
1524例健康志愿者血清和血浆样品进行测定，所有的样品测量小于****。
7、特异性
本试剂盒识别天然和重组人癌胚抗原（CEA），与结构类似物无交叉。
8、稳定性
2℃-8℃保存，有效期6个月。