Phospho-Akt (Ser473) (736E11)

【求助】磷酸化的Akt不见了！！

(Ser473)(193H12)Rabbit mAb，1:300,稀释，二抗是驴抗兔，1：2000，我是实验室的新手，刚呆俩月，受 此挫折，一头雾水，请过来人或者有经验的同学帮忙解答怎样解决，非常感谢！ 碧峤 pAkt有两个位点，Ser473和Thr308，其中Ser473相对容易显色。如果显色失败，可能的原因:1 上样量过少，我们一般都是30μg；2 一抗孵育时间过短，我们一般24h~48h；3 一抗是否工作有待排除 米宝

组化染色背景高？没信号？一篇文章带你快速掌握免疫组化！

：使用 Anti-phospho-Akt (Ser473) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。（图 A）使用免疫组化试剂盒M&R HRP/DAB Detection IHC Kit，抗体 1:100 稀释；(图 B) 采用普通免疫组化试剂盒，抗体 1:25 稀释。 图 6 免疫组化实验检测 Erk1/2 表达 注：使用 Anti-Erk1/2 Mouse mAb与p44/42 MAPK （Erk1/2）Rabbit mAb 对正常小鼠心脏组织进行免疫

WB实战指南（四）之 难点：抗体孵育

signaling的产品，诸如Akt总抗和Ser473（这两种抗体R&D的产品效价不错）。（特别注明：前几年CST的AKT抗体识别的条带在55KDa左右，而其他公司均认定为60KDa；最近还有战友提问这个抗体，重新检索了一下，应该是原AKT抗体（包括磷酸化）已经被CST自己下架了，从目前的几个抗体示意图看，大小也已与其他公司一致；因此，要不要买取决你自己）抗体公司在出售抗体的时候，在广告上会玩很多花样。A.不给整张膜标记的图示。很多抗体质量不好，背景高杂带多，如果靶蛋白区域较干净时，他们通常只给很窄的一条靶蛋白