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文献和实验Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞
后可供培养或检测用。 (三)分离纯化细胞举例 1. 富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五种不同密度的Percoll,如用10ml试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2～1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10８悬于１ml培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK杀伤活性的LGL细胞位于42.5％与45％Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
Percoll不连续密度梯度沉淀法分离纯化淋巴细胞和淋巴母细胞
和回收。 4. 离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll之间密度差别不大，因此 离心机 加速、降速时要慢，要平稳。 5. 取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。 (三)分离纯化细胞举例 1. 富含NK活性大颗粒淋巴细胞
流式课堂 | 裂红 or 分离液？外周血不同制备方法应用场景
、粒细胞等），需要裂解红细胞；倘若检测的是红细胞，不需要裂解红细胞； ⊙ 如果后续样本不用于流式分析，而是需要培养或者冻存复苏，使用裂红后培养的细胞，活性可能会打折扣。 Ficoll 密度梯度离心法 01 原理 根据细胞的沉降系数差异，借助细胞分离液和离心操作，对细胞进行分离。 02 优点 ⊙ 获得的细胞更纯净，有利于细胞培养后检测胞内因子 ⊙ 可将细胞冻存后再复苏、培养、检测 ⊙ 去除死细胞 03 缺点 ⊙ 步骤复杂，需 30min 以上 ⊙ 取白膜层需要丰富的经验 ⊙ 只能获得淋巴细胞和单核
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